Tælling af hvide blodlegemer

Princip. Tælling af leukocytter under mikroskopi i et bestemt antal kvadrater i tællekammeret og beregning af deres antal i 1 liter blod under hensyntagen til fortynding af blod og tællingens volumen.

Reagens: 3-5% opløsning af eddikesyre, tonet til farvende kerner af leukocytter med et par dråber methylenblåt opløsning. Løsningen har en blå farve, der kan opbevares i lang tid.

Forløbet af beslutsomhed. I et tørt reagensglas hældes 0,4 ml eddikesyreopløsning. 0,02 ml blod samles fra en finger (du kan bruge antikoagulationsstabiliseret venøst ​​blod). Tør tipet af pipetten, blæs derefter blod fra det til bunden af ​​røret, bland det, bland det igen og blæs blandingen af ​​blod og reagens (pipettering). Mærk røret og lad det ligge indtil tællingen. Opbevar en blanding af blod med en opløsning af eddikesyre anbefales ikke mere end 2-4 timer.

Blodet fortyndet i et reagensglas med eddikesyre, blandes grundigt og fyldes med et tællekammer. Det fyldte kammer efterlades i en vandret position i 1 min for at afregne de hvide blodlegemer. Uden at ændre kameraets vandrette stilling placeres den på mikroskopets bord og ved lav forstørrelse (okular 10 ×, linse 8 ×) tæller de hvide blodlegemer i 100 store firkanter, hvilket svarer til 1600 små.

For større nøjagtighed tælles leukocytter over gitteret i store firkanter, ikke opdelt i små firkanter og striber, der starter fra det øverste venstre hjørne af gitteret. For bedre kontrast mørk synsfeltet, slip kondensatoren og luk blænderen. Cellerne placeret inden for firkanten og liggende på to linjer tælles for ikke at tælle samme celle to gange.

Beregningen af ​​antallet af leukocytter udføres ifølge formlen:

hvor X er antallet af leukocytter i 1 μl blod; og - antallet af leukocytter i 100 store firkanter 20 - blodfortynding 100 er antallet af store firkanter; 250 er konverteringsfaktoren pr. 1 μl, da mængden af ​​en stor firkant er 1/250 μl (siden af ​​firkanten er 1/5 mm, højden er 1/10 mm).

I praksis, for at beregne antallet af leukocytter i 1 μl blod, multipliceres deres antal i 100 store kvadrater med 50, og i 1 liter - multipliceres den resulterende værdi med 106.

Bemærk. Ved tælling af leukocytter er en fejl uundgåelig i 6-8% af tilfældene.

1. Med et stort antal normocytter i perifert blod tælles de i antallet af leukocytter (både leukocytter og normocytter - kernerede celler). For at ordentligt fastslå antallet af leukocytter bør det samlede antal nucleerede blodceller trække antallet af normocytter tilbage.
2. De resterende fejl svarer til dem, der opstår ved beregning af antallet af røde blodlegemer i tællekammeret.

Leukocyttælling

At samle blod i leukocytblanderen til mærket 0,5. Tilsæt øjeblikkeligt til blodet en fortyndingsopløsning af 3% eddikesyre til markering 11. Bland grundigt indholdet af kapillæren og genfyld Goryaevs kammer med det. Tællingen udføres i mindst 100 store firkanter. Disse er store uformede linjer, der er grupperet i fire i Goryaev-kameraets gitter. Beregn antallet af leukocytter i 1 liter blod med formlen:

L = N x 4000 x 20 x 10 6

hvor: N er antallet af leukocytter i hundrede store firkanter; 4000 er en multiplikator, der reducerer volumenet af en lille firkant til mængden af ​​1 μl blod; 20 - korrektion for graden af ​​blodfortynding 1600 - antallet af leukocytter i små firkanter 10 6 - antallet af mikroliter i 1 l.

Anbefalinger til registrering

Sammenfattet sammenligner resultaterne opnået med de normale værdier.

Lab № 7.3

Bestemmelse af mængden af ​​hæmoglobin i blodet

194.48.155.245 © studopedia.ru er ikke forfatteren af ​​de materialer, der er indsendt. Men giver mulighed for fri brug. Er der en ophavsretskrænkelse? Skriv til os | Kontakt os.

Deaktiver adBlock!
og opdater siden (F5)
meget nødvendigt

Tælling af hvide blodlegemer

Leukocytose kan være absolut (sand) og relativ (omfordelende).

Absolut leukocytose observeres ved akutte inflammatoriske processer, vævsnekrose, akutte bakterielle infektioner (med undtagelse af tyfusfeber, brucellose, tularemi osv.), Allergiske tilstande, maligne tumorer (med vævsdestruktion), lukkede hovedskader og blødninger i hjernen, diabetes. uræmisk koma, chok, akut blodtab, som den primære reaktion - med strålingssygdom. En signifikant stigning i antallet af leukocytter forekommer med leukæmi.

Relativ (omfordeling) er en konsekvens af kvitteringen af ​​leukocytter i blodgennemstrømningen fra de organer, der tjener til hendes depot. Det opstår efter at have spist (mad leukocytose), varme og kolde bade, stærke følelser (vegetovaskulær leukocytose), intenst muskulært arbejde (myogen leukocytose) osv.

Leukopeni. Leukopeni betragtes som en indikator for hæmning af knoglemarvets funktionelle evne som følge af eksponering for giftige stoffer (arsen, benzen osv.), Nogle lægemidler (sulfanilamider, chloramphenicol, butadion, immuno, cyclophosphamid osv.), Vira (influenza, viral hepatitis, mæslinger osv.), mikrober (tyfus, brucellose osv.), ioniserende stråling, røntgenstråler og hypersplenisme (øget miltfunktion).

Leukocytose og leukopeni karakteriseres sjældent ved en proportionel stigning (reduktion) i det totale antal leukocytter af alle typer (fx leukocytose med fortykkelse af blodet); i de fleste tilfælde er der en forøgelse (fald) i antallet af en enkelt celletype, derfor benyttes termerne "neutrofili", "neutropeni", "lymfocytose", "lymfopeni", "eosinofili", "eosinopeni", "monocytose", "monocytopeni", "Basophilia."

I den kliniske evaluering af ændringer i antallet af leukocytter er stor betydning knyttet til procentforholdet mellem individuelle former for leukocytter, det vil sige leukocytformel.

Leukocyt blodtal for en sund person:

Relativ mængde Absolut mængde

Basofiler............................0-1% 0-0.0650 x 10 9 / l

Eosinophils.........................0.5-5% 0.02-0.30 x 10 9 / l

Neutrofiler: - myelocytter............ 0% fraværende

- stakkede... 1-6% 0,040-0,300 x 10 9 / l

- segmenteret....47-72% 2,0-5,5 x 10 9 / l

Lymfocytter..................................19-37% 1,2-3,0 x 10 9 / L

Monocytter.............................. 3-11% 0,09-0,6 x 10 9 / L

Leukocyttælling udføres i farvede perifere blodudstrygninger. For den korrekte fortolkning af resultaterne af undersøgelsen af ​​leukocytformlen anbefales det at tælle i absolutte mængder, men ikke i relative. De mest almindelige metoder til maleri udsmykning af Romanovsky-Giemsa, Pappenheim. Under nedsænkning tælles mindst 200 celler, og derefter er procentforholdet mellem visse typer leukocytter afledt. Analyse af leukogram under hensyntagen til andre blodparametre og det kliniske billede er en værdifuld undersøgelsesmetode, det hjælper med diagnosticering og bestemmelse af sygdommens prognose.

Hovedårsagerne til neutrofili.

Akutte bakterielle infektioner - lokaliseret og generaliseret.

Inflammation eller nekrose af vævet.

Lægemidler (kortikosteroider).

Hovedårsagerne til neutropeni.

Infektioner - bakteriel (tyfusfeber, brucellose, tularemi, paratyphoid feber) og viral (infektiøs hepatitis, mæslinger, influenza, røde hunde og andre).

Myelotoksiske virkninger og undertrykkelse af granulocytopoiesis (ioniserende stråling; kemiske stoffer - benzen, anilin, DDT; medicinske virkninger - cytostatika og immunosuppressiva; vitamin B₁₂-folsyre-mangelanæmi, akut aleukæmisk leukæmi, aplastisk anæmi).

Antistofeksponering (immune former) - Overfølsomhed overfor lægemidler, autoimmune sygdomme (SLE, reumatoid arthritis, kronisk lymfatisk leukæmi), isoimmune manifestationer (hæmolytisk sygdom hos nyfødte).

Omfordeling og deponering i organer - chokbetingelser, sygdomme med splenomegali og hypersplenisme.

Arvelige former (familiær godartet kronisk neutropeni).

Hovedårsagerne til eosinofili.

Parasitiske invasioner (trichinose).

Kroniske hudlæsioner - psoriasis, pemphigus, eksem.

Tumorer (eosinofile varianter af leukæmi).

Andre sygdomme - fibroplastisk endokarditis Lefflera, skarlagensfeber.

I genoprettelsesfasen af ​​infektioner og inflammatoriske sygdomme (gunstigt prognostisk tegn).

Årsager til eosinopeni (aneosinofili).

Øget adrenokortikosteroid aktivitet i kroppen.

Hovedårsagerne til basophili:

Kronisk myeloid leukæmi og erythremi.

Hovedårsagerne til monocytose.

Subakutte og kroniske bakterielle infektioner.

Parasitiske infektioner - leishmaniasis, malaria.

Hemoblastose - monocytisk leukæmi, lymfogranulomatose, lymfomer.

Andre tilstande er SLE, sarcoidose, rheumatoid arthritis, infektiøs monocytose; i perioden med opsving fra infektioner, når de forlader agranulocytose efter splenektomi.

Faldet i antallet af monocytter er vigtigt først og fremmest ved vurdering af lymfocyt-monocytisk forhold i lungetuberkulose.

Hovedårsagerne til lymfocytose.

Infektioner - akut virus (infektiøs mononukleose, mæslinger, rubella, kyllingepoks), kronisk bakteriel (tuberkulose, syfilis, brucellose), protozoal (toxoplasmose).

Hemoblastose (lymfocytisk leukæmi, lymfom).

Andre sygdomme - hypertyreose, Addison's sygdom, vitamin B₁₂-folisk mangelanæmi, hypo- og aplastisk anæmi.

Lymfocytopeni observeres i SLE, Hodgkins sygdom, udbredt tuberkulose af lymfeknuderne, i den terminale fase af nyresvigt, akut strålingssygdom, immunodeficienttilstande, idet der tages glucocorticoider.

Forøgelsen eller faldet i antallet af visse typer leukocytter i blodet kan være relativt eller absolut. Hvis kun procentdelen af ​​en bestemt type hvide blodlegemer ændres, finder der relativ neutrofili, relativ eosinopeni mv sted. Forøgelse eller reduktion i det absolutte indhold af enhver type af hvide blodlegemer, dvs. antallet af dataceller pr enhed af blodvolumen kaldes absolut neutrofil absolutte eosinopeni etc.

Skiftning af formlen til venstre (forøgelse af antallet af unge former for neutrofiler) er et tegn på betændelse eller en nekrotisk proces i kroppen.

Skiftet af leukocytformlen til højre er karakteristisk for strålingssygdom og vitamin B₁₂-folsyre-mangelanæmi.

Fraværet eller signifikant reduktion i antallet af alle typer granulære leukocytter - granulocytter (neutrofiler, eosinofiler, basofiler) betegnes med betegnelsen agranulocytose. Afhængig af forekomningsmekanismen er myelotoksiske (virkninger af ioniserende stråling, cytostatisk indtagelse) og immun (hapten og autoimmun agranulocytose) kendetegnet.

Leukocyttælling

Tællemetoden i kameraet. Udtagning og fortynding af blod produceret ved rørmetoden. 0,4 ml fortyndingsvæske og 0,02 ml kapillærblod indføres i røret (fortrinsvis Vidalevskaya). Den resulterende fortynding anses praktisk talt for at være 1:20. En 3-5% opløsning af eddikesyre tonet med methylenblåt anvendes sædvanligvis som fortyndingsmiddel (eddikesyre lyses erythrocytter, methylenblå pletter kernerne af leukocytter). Før påfyldning af kammeret Goryaeva rør med fortyndet blod rystes grundigt. Kammeret er fyldt på samme måde som for røde blodlegemer.

Leukocytter er meget mindre end erythrocytter (1-2 pr. Store kvadrat), derfor er der for nøjagtighed foretaget tællinger i 100 store firkanter (ugraderet). Beregning: 100 store firkanter (1600 små) tælles en leukocyt.
Husk at mængden af ​​en lille firkant er 1/4000 mm3, og blodet fortyndes 20 gange, antallet af leukocytter i 1 μl blod beregnes: 4000 20 og divideret med 1600 = a x 1/2. For at opnå det faktiske indhold af leukocytter i 1 μl blod er det tilstrækkeligt at dividere i det halve antal opnået i beregningen og tilføje 2 nuller. Den gennemsnitlige metodefejl er ± 7%.

Mere præcis (2-3% fejl) og perfekt er antallet af leukocytter ved hjælp af elektroniske enheder. Tællingen af ​​leukocytter i partikeltællere udføres ifølge samme princip som erythrocytter. Forblod fortyndes og blandes med eventuelle reagenslysering af røde blodlegemer. I "Technicon" autoanalyseren anvendes en opløsning af eddikesyre som sådan i "Culter" og "Celloskop" -enhederne - saponin eller sapoglobin, der tilsættes fortyndet (1: 500, 1: 700) i isotonisk natriumchloridopløsning (6 dråber pr. 20 ml fortynding).

Blodlegococyttælling udføres i farvede perifere blodudsmidninger.
Det er bedre at tælle på det tyndeste punkt tæt ved smørets ende, mindst 200 celler (undtagen udtalt leukopeni), og derefter udlede procentdelen af ​​visse typer af hvide blodlegemer. Tælling anbefales i samme rækkefølge: Halvdelen af ​​cellerne skal tælles øverst, halvt i bunden af ​​slagtilfælde uden at gå til selve kanten og midt, zigzagging (3-4 synsfelt langs slagtilfælde, 3-4 felter vinkelret på midten af ​​slagtilfælde, derefter 3-4 felter til siden parallelt med kanten, igen vinkelret opad og så videre til den ene side).

Fremstilling af udstrygninger. Nøje vasket og fedtet glas (dens kant) rører en bloddråbe på injektionsstedet. Smøre gør slibeglas, sæt den i en vinkel på 45 ° til glideren foran dråben. Efter at have bragt glasset til denne dråbe, venter de, indtil blodet spredes langs kanten, så med en hurtig let bevægelse udfører de slibeglasset fremad og tager det ikke væk fra motivet, før det tørrer hele dråbet.

Et korrekt smurt har en gullig farve (tynd), når ikke glasets kanter og slutter i et spor (overskæg).

Farvning af tørt smør fremstillet efter foreløbig fixering. Den bedste fiksering opnås i absolut methylenalkohol (3-5 minutter) eller i en blanding af Nikiforov af lige dele af absolut ethanol og ether (30 minutter).

De vigtigste hæmatologiske maling indbefatter methylenblåt og dets derivat - azurblåt I (methylen azurblåt) og azurblå II (en blanding af lige dele azurblå I og methylenblåt) til surt vandopløseligt gult eosin.

● Maleri af Romanovsky-Giemsa. Romanovsky-Giemsa-maling (fabriksfremstillet) har følgende sammensætning: Azur II - 3 g, vandopløselig gul eosin - 0,8 g, methylalkohol - 250 ml og glycerin - 250 ml. Arbejdsmalingopløsningen fremstilles ved en hastighed på 1,5-2 dråber af den færdige maling pr. 1 ml destilleret vand. Malingen hældes på et smear med et højere lag; farvningstid - 30-35 minutter Efter denne periode vaskes vatpindene med vand og tørres i luft. I denne metode er det muligt at differentiere kernen godt, men cytoplasmens neutrofile granularitet er meget værre, så det er meget anvendt til farvning af et perifert blodsprøjt.

● Kombineret maj-Grunwald-Romanovsky-Giemsa farvning ifølge Pappenheim. Et færdigt farvestof, et maj-Grunwald fixativ, som er en opløsning af eosinmethylenblåt i methylenalkohol, pipetteres på et fast smear i 3 minutter. Efter 3 minutter tilsættes en lige stor mængde destilleret vand til maling, der dækker opløsningen, og farvningen fortsættes i yderligere 1 minut. Derefter vaskes malingen, og smøret tørres i luften. Derefter males det tørrede smear med en nylavet vandig opløsning af Romanovsky-maling i 8-15 minutter. Denne metode betragtes som den bedste, især for udtværinger af marv punkt.

En stigning i antallet af leukocytter i det perifere blod over det normale niveau kaldes leukocytose, et fald kaldes leukopeni. Leukocytose (leukopeni) karakteriseres sjældent ved en proportionel stigning (reduktion) i antallet af leukocytter af enhver art, for eksempel leukocytose med fortykkelse af blodet. I de fleste tilfælde er der en stigning i antallet (fald) af en enkelt celletype. Forøgelsen eller faldet i antallet af individuelle typer leukocytter i blodet kan være relativt eller absolut, afhængigt af det totale leukocytantal - normalt, forhøjet eller nedsat. Ændringen i antallet, forholdet mellem individuelle former og morfologi af leukocytter afhænger af patogenens type og virulens, arten, kursen og omfanget af den patologiske proces, den individuelle reaktion af organismen.

Leukocytter (leukocytter)

Leukocytter. Kvantitativ bestemmelse af leukocytter. Tælle leukocytter ved hjælp af kameraet Goryaeva. Kvantitativt indhold af leukocytter. Leukocytose.

Hvide blodlegemer

Antallet af leukocytter i blodet afhænger både af deres dannelseshastighed og på deres mobilisering fra knoglemarven såvel som på deres udnyttelse og migration i vævene (til læsionerne), indfangning af lungerne og milten. Disse processer påvirkes igen af ​​en række fysiologiske faktorer, og derfor er antallet af leukocytter i en sund persons blod udsat for udsving: det stiger ved slutningen af ​​dagen under fysisk anstrengelse, følelsesmæssig stress, indtagelse af proteinfødevarer og pludselige ændringer i omgivelsestemperaturen.

Kvantitativ bestemmelse af leukocytter

Leukocytter tælles ved hjælp af Goryaev kameraet og ved hjælp af automatiske tællere.

Tælle leukocytter ved hjælp af kameraet Goryaeva

Med in vitro-metoden til at tage blod for at tælle leukocytter:

• 0,4 ml af en opløsning af 3-5% eddikesyre tonet med methylenblåt hældes i røret. Brug en kapillærpipette til at tegne 20 μl blod fra en frisk dråbe (fortynding 20 gange), blæk forsigtigt i et reagensglas med et reagens og skyl pipetten. Bland godt
• et rent og tørt dækglas gnides på kammeret, så regnbue ringe danner ved kontaktpunktet;
• Blod fortyndet i et reagensglas, bland godt. Enden af ​​en rund glasstang tager en dråbe blod og bringer den til kanten af ​​kammerets polerede glas;
• efter påfyldning af kammeret står det i 1 minut i ro for sedimentation af leukocytter;
• Leukocytter betragtes ved lav forstørrelse (objektiv × 8 eller × 9, okular × 10 eller × 15) med mørkere synsfelt (med nedsænket kondensator eller indsnævret membran);
• Til tilfredsstillende resultater tælles leukocytter i 100 store firkanter.

At vide mængden af ​​et stort firkant og graden af ​​fortynding af blod, find antallet af leukocytter i 1 μl og 1 liter blod. Siden af ​​det store torv er 1/5 mm, området er 1/25 mm2, rumfanget over dette torv er 1/250 mm3.

Formel til tælling af hvide blodlegemer:

hvor B er antallet af leukocytter i 100 store firkanter;
P - fortyndingsgrad (20).

Leukocyttælling

Norm: 4,0-9,0 × 10 9 / L

Forøgelsen af ​​antallet af leukocytter over 9,0 × 10 9 / l kaldes
leukocytose, et fald i deres antal under 4,0 × 10 9 / l - leukopeni. Imidlertid kan endog 3,5 × 10 9 i 1 liter leukocytter til en række individer være normen. Ifølge litteraturen har sådanne mennesker øget immunresistens, og de er mindre tilbøjelige til at blive syge, hvilket tilsyneladende skyldes behovet for et immunrespons at have en reserve af leukocytter i væv, hvor der er 50-60 gange mere end i blodbanen. Det er klart, at hos sunde individer med lave hvide blodlegemer i perifert blod øges deres reserver i væv tilsvarende. Dette fænomen forklares af arvelig og familiær karakter eller ved en stigning i påvirkning af det parasympatiske nervesystem.

Leukopeni kan være funktionelt og organisk.
Funktionel leukopeni er forbundet med dysregulering af bloddannelse og observeres:

• med nogle bakterielle og virale infektioner (tyfusfeber, influenza, kopper, rubella, Botkin's sygdom, mæslinger);
• under virkningen af ​​stoffer (sulfonamider, analgetika, antikonvulsiva midler, antithyroid, cytostatiske og andre lægemidler);
• under muskulært arbejde, introduktion af fremmed protein, nerve- og temperatureffekter, sult, hypotoniske tilstande;
• falsk leukocytopeni kan være associeret med leukocytaggregering under langtidsopbevaring af blod ved stuetemperatur (mere end 4 timer).

Organisk leukopeni som følge af knoglemarv aplasi og dens udskiftning med fedtvæv opstår når:

• aplastisk anæmi;
• agranulocytose;
• leukopenisk leukæmi;
• nogle former for Hodgkins sygdom;
• ioniserende stråling;
• hypersplenisme (primær og sekundær);
• kollagen sygdomme.

leukocytose

Leukocytose er reaktionen af ​​det hæmatopoietiske system til virkningerne
eksogene og endogene faktorer. Der er fysiologisk og patologisk leukocytose.

Fysiologisk leukocytose er:

• fordøjelsesvæske - efter at have spist, især højt i protein; antallet af leukocytter overstiger ikke 10,0-12,0 × 10 9 / l og efter 3-4 timer vender det tilbage til det normale;
• med følelsesmæssig stress (adrenalin), alvorlig fysisk anstrengelse, afkøling, for høj solstråling (solskoldning), administration af et antal hormoner (catecholaminer, glukokortikosteroider osv.) i anden halvdel af graviditeten under menstruation og på grund af den ujævn fordeling af leukocytter i blodet den almindelige.

Patologisk leukocytose er opdelt i absolutte og relative.

Absolut leukocytose - en stigning i antallet af leukocytter i blodet op til flere hundrede tusinde (100,0-600,0 × 10 9 / l og mere).

• Oftest observeret i leukæmi: i kronisk leukæmi - i 98-100% af tilfældene i akut leukæmi - i 50-60%. Ændring af forholdet mellem leukocytceller i knoglemarv og blodpunkta tjener som grundlag for diagnosen leukæmi.

Relativ leukocytose observeres:

• akutte inflammatoriske og infektiøse processer, med undtagelse af tyfusfeber, influenza, kopper, rubella, Botkin's sygdom, mæslinger. Den største leukocytose (op til 70,0-80,0 × 10 9 / l) observeres i sepsis;
• under påvirkning af giftige stoffer (insektgift, endotoksiner), ioniserende stråling (umiddelbart efter bestråling);
• som følge af virkningen af ​​kortikosteroider, adrenalin, histamin, acetylcholin og digitalispræparater;
• med vævsdestintration (nekrose), myokardieinfarkt, trombose af perifere arterier med udvikling af gangren, forbrændinger, exudativ pleurisy, perikarditis, uremi, hepatisk koma;
• signifikant blodtab i skader, indre, gynækologiske og andre blødninger.

Forøgelsen af ​​antallet af leukocytter i infektionssygdomme ledsages i de fleste tilfælde af et skift af leukocytformlen til venstre

Tælling af antallet af leukocytter og blodplader

Faktorer der påvirker rigtigheden af ​​undersøgelsen af ​​hvide blodlegemer

- lang opbevaring af blod ved stuetemperatur

Norm af indholdet af leukocytter i blodet

Alder Antal leukocytter

- 1 dag 11,6 - 22,0

- 1 uge 8,1.- 14,3

- 1 måned 7,6 - 12,4

- Voksne 4,0 - 9,0

Metoder til bestemmelse af antallet af leukocytter i blodet.

- Tæller antallet af leukocytter i tællekammeret

- Tælle leukocytter i hæmatologiske analysatorer

Bestemmelse af antallet af leukocytter i tællekammeret.

- Tælling af leukocytter under et mikroskop udføres efter lysering af røde blodlegemer i 100 store kvadrater i tællegitteret og genberegnes for 1 liter blod baseret på volumenet af kvadrater og fortynding af blod. Tællingen af ​​leukocytter bør foretages inden for 2-4 timer efter blodindsamling.

- Hvis der er nucleerede røde celler i det perifere blod, lyseres de ikke og tælles sammen med leukocytter. I dette tilfælde trækkes antallet af celler i den røde række for at bestemme det sande antal leukocytter fra det samlede antal tællede celler.

- For eksempel: Det samlede antal leukocytter i beregningen i kammeret (eller analysatoren) -45x109 / l. Ved beregning af leukocytformlen blev det konstateret, at 50 erythroblaster (normoblaster) er til stede pr. 100 leukocytter.

Vi beregner det ægte antal leukocytter i blodet:

150 celler - 45 x 109 / l

100 celler (leukocytter) - X

X = 100 * 45 * 10/1/150 = 30 * 10 / l

Således er det sande antal leukocytter i blodet 30 x 109 / l.

De vigtigste kilder til fejl ved beregningen af ​​leukocytter i kammeret:

- Forkert forhold mellem blod og eddikesyre volumener taget i et reagensglas.

- Forkert forberedt opløsning af eddikesyre (i en koncentration på mere end 5% kan nogle leukocytter lyse, hvilket vil føre til en undervurdering af resultatet).

- Langvarig eksponering af prøven ved temperaturer over 28 ° C, som kan accelerere lysis af leukocytter i prøven og føre til en undervurdering af resultatet.

- Forkert udfyldning af Goryaev-kammeret. Som med beregningen af ​​røde blodlegemer skal kameraet stå i 1 minut for at afregne cellerne.

- Goryaev-kameraet blev ikke vasket godt nok efter den foregående definition. Leukocytter tilbage i kammeret kan overvurdere resultaterne af analysen.

Blodplade tæller metoder

- i tællekammeret

Hver gruppe af metoder har fordele og ulemper.

- Tællingen af ​​blodplader i kammeret er tilstrækkeligt nøjagtig, kræver ikke at beregne antallet af røde blodlegemer. På den anden side er denne metode mere arbejdskrævende, da blodpladerne i den native form er repræsenteret af små og dårligt kontrastelementer. Ulempen ved fremgangsmåden er blodpladetælling i de kommende timer efter at have taget blod.

- Bestemmelse af antallet af blodplader i blodudsmid er signifikant ringere i nøjagtigheden af ​​kammermetoden eller automatiske tællere. Fejl ved tælling i blodudslip kan skyldes svag dårlige kvalitet og den dermed forbundne ujævn fordeling af blodplader, unøjagtig bestemmelse af antallet af røde blodlegemer. En signifikant ulempe ved fremgangsmåden er nødvendigheden af ​​samtidig at telle blodplader og røde blodlegemer i blodet. Fordelen ved det er evnen til at studere blodplader til enhver tid uanset tidspunktet for blodindsamling.

- Metoden til bestemmelse af blodplader ved hjælp af en hæmatologisk analysator giver dig mulighed for nøjagtigt at bestemme antallet af blodplader, deres gennemsnitlige volumen og volumenfordeling.

Leukocyttælling

Antal leukocytter beregnes ved hjælp af en automatisk tæller eller i et Goryaev-kammer. For at tælle leukocytterne i kammeret fremstilles en Turk væske. En eddikesyreopløsning tonet med en vandig opløsning af methylenblåt (0,1 ml af en 0,1% opløsning af methylenblåt sættes til 9 ml 10% eddikesyre). I et reagensglas hældes 0,4 ml flydende Türk. Få præcis 0,02 ml blod, tilsæt forsigtigt til fortyndingsvæsken. Fortynding af blod er 1:20. Bland godt og lad i 4 minutter. Fyld kammeret Goryaeva, efter omhyggeligt at ryste røret med fortyndet blod. Kameraet bliver efterladt i 1 min på en flad overflade til sedimentation af leukocytter. Så tælles leukocytter ved lav forstørrelse af mikroskopet (objektiv 8, okular 10 eller 15) med mørkret synsfelt (med kondensatoren sænket eller den indsnævrede membran). Leukocytter anses for at være i 100 ikke-frigivne store firkanter, hvilket svarer til 1600 små. Resultaterne af tælling af celler i store firkanter opsummerer og beregner deres antal i 1 μl blod ved hjælp af formlen:

hvor X er antallet af leukocytter i 1 μl blod; A - antallet af celler tælles i 100 store firkanter; 1600 - antallet af små firkanter; 20 - blodfortynding 4000 er en multiplikator, der resulterer i et volumen på 1 μl blod baseret på volumenet af en lille firkant (1/4000 μl).

Tælling af leukocytformel. Farvede perifere blodprøver undersøges. En nødvendig betingelse for korrekt overvejelse af de morfologiske træk ved blodceller er en korrekt lavet og godt farvet blodsprøjt. Et blodsprøjt udføres på tørre, rene, godt affedtede lysbilleder, alderen i en blanding af Nikiforov (ethylalkohol 96 º og diethylether 1: 1). Ved at tage et glasskinne til lange kanter, rør overfladen til en dråbe blod (men ikke hud), der frigives fra punkteringen, eller anbring en bloddråbe med en mikropipette eller en kapillær. Et glasglass holdes på bordet eller i venstre hånd for smalle kanter. Brug den højre hånd ved at anvende grundglaset med en smal kant til glasset med blod til venstre for dropen i en vinkel på 45 ° og skub den til højre, indtil den rører ved blodet. De venter til blodet spredes over hele kanten af ​​grundglaset, og derefter med en hurtig hurtig bevægelse føres det fra højre til venstre, indtil hele dråbet er opbrugt. En dråbe blod skal være lille og proportioneret, så hele smøret placeres på glasset og ikke når 1-1,5 cm før dets kant. Et godt fremstillet smear er tyndt, har en gullig farve og slutter i en "kost". Lufttørrede blodudslæt anbringes i specialretter til fiksering eller i almindelige glasbriller fyldt med fastgørelsesvæske (methylalkohol, fixeringstid 3-5 minutter, ethylalkohol, 30 minutter, Nikiforov-blanding, 20-30 minutter). Faste præparater tørres i luften og farves derefter med Romanovsky-Giemsa-farvestof. Den færdige malingsopløsning Romanovsky-Giemsa (azureosin) fortyndes 1:10 i det krævede volumen til farvning. Faste udstrygninger hældes med fortyndet maling, der hældes på smøret med et muligvis højere lag. Farvning varer, afhængigt af lufttemperaturen i rummet fra 25 til 45 minutter. Efter afslutning af malingen afvaskes malingen med destilleret vand og sætter streger lodret i en træplade til tørring. Mikroskopi af blodudstrygninger udføres med nedsænkning ved 100x10 forstørrelse. Tælling af leukocytter udføres langs en zigzaglinie ("Meander line"). 100-200 celler tælles under hensyntagen til antallet af individuelle former for leukocytter: stiv og segmenterede neutrofiler, eosinofiler, basofiler, monocytter, lymfocytter. Beregn procentdelen af ​​hver celletype.

Tæller det absolutte antal fagocytter og lymfocytter. Det absolutte antal fagocytter (neutrofiler og monocytter) og lymfocytter hos højere hvirveldyr beregnes på grundlag af data om antallet af leukocytter i perifert blod og leukocytformel.

Phagocytisk funktionstest

Bestemmelse af fagocytisk indeks og fagocytisk nummer

Et stort antal teknikker er blevet udviklet for at vurdere leukocytternes absorption og fordøjelsesaktivitet. Alle er baseret på phagocytes evne til at absorbere fremmede partikler, der udgør testsystemet (en bestemt type mikroorganisme, zymosan, latex - absorptionsobjektet). Åbenbaringen udføres in vitro eller in vivo. Det generelle bestemmelsesniveau er som følger: Hepariniseret eller citreret friskblod (eller phagocyt suspension) blandes med et lige stort volumen suspenderet daglig mikrobiel suspension (Saccharomyces cerevisiae, Staphilococcus aureus, S. albus, E. coli, A. nhydrophila) eller en anden absorptionsobjekt. Blandingen blandes forsigtigt og anbringes i en termostat (37-40ºі - for varmblodig afhængig af kroppens normale temperatur, 26 ° C - til varmelovende fisk og lavere for koldt). Efter 15, 30, 45, 60 og 90 minutter fremstilles udsmykninger på glider, tørres, fastgøres med methylalkohol eller en Nikiforov-blanding og farves efter Romanovsky-Giemsa. De ser på udstødninger under nedsænkning og bestemmer fagocytisk aktivitet - andelen fagocytter, der deltager i fagocytose, fagocytisk indeks - antallet af testmikroer fanget af en fagocytisk leukocyt, fagocytisk tal - det gennemsnitlige antal fagocytiske genstande pr. 1 aktiv neutrofile. Evaluering af indikatorer ved forskellige tidsintervaller giver os mulighed for at estimere fagocytosens dynamik. Normalt skal det fagocytiske indeks efter 90 minutter være lavere end efter 45 minutter og 60 minutter på grund af fordøjelsen af ​​mikrober. I tilfælde af krænkelse af fordøjelsen ændres det ikke.

Vurdering af phagocyternes funktionelle aktivitet ved reduktionsreaktionen af ​​nitroblåtetrazol

Denne test er en indikator for fagocytternes baktericide funktion og giver dig mulighed for at evaluere deres evne til iltafhængig drab. Når denne drabsmekanisme aktiveres aktiveres enzymet NADPH oxidase, hvilket fører til udseendet af reaktive oxygenarter i fagocyt. Frigivelsen af ​​sådanne stoffer i cellen kaldes en ilt (respiratorisk) eksplosion, som kan registreres ved hjælp af NBT testen. I formuleringen af ​​denne test tilsættes stoffet nitrosiniumtetrazolium til fagocytterne, det absorberes af cellen, og i nærvær af reaktive oxygenarter omdannes til et mørkblåt farvet stof diformazan. Jo mere mørkeblå granulater er fastgjort på overfladen eller inden i fagocyten, desto mere aktive iltformer dannes, jo mere iltafhængige drab.

NBT-testen er indstillet i to versioner: spontan og induceret. Når man opretter en spontan NBT-test, dyrkes fagocytter i nærvær af NST uden forudgående aktivering af cellerne, når der udføres den inducerede NBT-test, tilsættes en aktivator af fagocytreaktionen til dyrkningsmediet. Indstillingen af ​​NBT-testen i to varianter tillader beregning af cellernes funktionelle reserve, hvilket er forskellen mellem antallet (intensitet) af inducerede diformazan-positive celler og antallet (intensiteten) af spontane diformazan-positive celler. Værdierne af den inducerede NBT-test karakteriserer aktiviteten af ​​fagocytiske celler i nærvær af en antigenstimulus og betragtes som et kriterium for deres beredskab til fuldstændig fagocytose. Den spontane NBT-test gør det muligt at estimere graden af ​​aktivering af iltafhængige drabsmekanismer af ikke-aktiverede fagocytter. Det karakteriserer graden af ​​aktivering af intracellulære mikrobicide systemer.

For at danne en spontan NBT-test tilsættes 0,05 ml af en 0,2% opløsning af NBT i kaliumphosphatpuffer (0,1, pH 7,3) og 0,05 ml af den samme buffer til 0,1 ml blod. Parallelt anbringes en prøve for at tage højde for den inducerede NBT-test, hvor i stedet for 0,05 ml buffer tilsættes det samme volumen fagocytisk aktivator (fx pyrogenal ved en koncentration på 50 μg / ml). Reaktionsblandingen termosteres i et vandbad ved 37 ° C (30-60 minutter). Mellemdensitetsudstrygninger fremstilles, tørres i luft og fastgøres i ethylalkohol eller Nikiforov-blanding (20 min) og males derefter med en vandig opløsning af neutralt rødt (0,1%, 1 min)

Efter reaktionen er blodtryk mikroskoperet under nedsænkning (100 × linse, 10 × okular). Blandt 100 celler tælles andelen af ​​aktiverede neutrofiler (DAN,%) indeholdende diformazangranuler. Antallet af deponerede i cellerne af diphormazan vurderer deres aktivitet i vilkårlig enheder og beregner indekset for neutrofiltaktivering (IAN, anvendt):

hvor er H_neg. - antallet af celler, der ikke indeholder diformazan granuler;

H₁ - antallet af celler, hvor området af diformazanaflejringer er mindre end 1/3 af kernens areal

H₂ - antallet af celler, hvor forekomster af diformazan tager fra 1/3 til hele størrelsen af ​​kernen

H₃ - Antallet af celler, hvor diformazanaflejringer optager et større område af kernen.

Afledningen af ​​mobiliseringskoefficienten (KM) udført i overensstemmelse med følgende formel: