Tilgængeligheden af moderne anti-hepatitis B (HBV) lægemidler med klare indikationer for deres administration kræver en nøjagtig og hurtig kontrol af diagnosen. På grund af knappe kliniske data i de første uger af sygdommen og begrænsede immunanalysemetoder for analyse falder diagnosens hastighed dog.
Tilstedeværelsen af markører anti-HBc IgM, HBsAg, anti-HBc, HBeAg, anti-HBe giver dig mulighed for at bekræfte HBV eller fastslå en tidligere sygdom. Men det er muligt at bestemme tilstedeværelsen af aktive virale partikler i blodet og tælle deres antal på tidspunktet for undersøgelsen ved hjælp af PCR - en kvantitativ sanntidsprøve til detektion af hepatitis B. Metoden sammenligner med diagnosticeringsmetoderne ELISA med diagnostiske problemer og gør det muligt at forudse sygdommens forløb under modtagelsen antivirale lægemidler.
Grundlæggende om sygdomsdiagnose
Diagnose af hepatitis B er baseret på vurdering af kliniske manifestationer, enzymimmunoassay og instrumentelle metoder til forskning. Sygdommen opstår i den akutte fase efter inkubationsperioden og afhænger af infektionsdosis og effektiviteten af behandlingen, går i et kronisk stadium. Hovedformålet med behandlingen er at forhindre kronisering, det vil sige eliminering af alle virale partikler fra blodet. Det kliniske forløb af sygdommen er en kur uden efterfølgende viremi.
Faktumet ved at eliminere infektionen skal bevises ved en kvantitativ metode til forskning.
Da ethvert immunitest med kvalitativ enzym gør det muligt at diagnosticere HBV indirekte, det vil sige, det viser ikke patogenens tilstedeværelse i kroppens indre miljø, men karakteriserer immunresponset på infektionen, overvågning af effektiviteten af terapi, og kendsgerningen om helbredelse bliver vanskeligt at bevise. Derfor bør patienten med hepatitis B eller med tilstedeværelsen af diagnostiske kriterier i sin favor udføres polymerasekædereaktion for at kvantificere antallet af virale partikler i blodet. Den diagnostiske hastighed er manglen på kopier af DNA'et af infektionen.
Beskrivelse af diagnosemetoden
Den meget følsomme metode til PCR-diagnose af hepatitis B tilhører kategorien genetisk manipulerede molekylærbiologiske undersøgelser. Gennem det bestemmes mængden af viralt DNA i patientens biologiske materiale og den tilladte hastighed. Ifølge de opnåede resultater er antallet af viruspartikler pr. Enhedsvolumen etableret. Materialet til den diagnostiske test er patientens venøse blod. Et indtag er ønskeligt på tom mave på grund af den mulige virkning af chyleserum på resultatet af undersøgelsen.
De opnåede resultater skal gives til lægen for fortolkning og bestemmelse af yderligere taktik. Uafhængig dekodning repræsenterer ikke diagnostisk værdi.
Betydningen af resultatet af antallet af virale partikler opnået ved PCR-metoden overstiger værdien af enzymimmunoassays. Da analysen i realtidstilstand viser tilstedeværelsen af sygdomsfremkaldende middel i blodet, er informationsindholdet højere end andre. Hvis ELISA kun angiver tilstedeværelsen af antistoffer, der observeres fra 4 uger af inkubationsperioden og varer mere end 8 uger efter viruseliminering fra blodet, bekræfter polymerasekædereaktionen klart sygdommens aktive forløb eller dets kur, karakteriserer dynamikken i den foreskrevne behandling.
Polymerasekædereaktion med kvantitativ bestemmelse af patogenpartikler løser diagnostiske spørgsmål til fordel for at stoppe behandlingen på grund af genopretning eller vedvarende behandling på grund af manglende effektivitet. Metoden er så specifik som mulig for HBV-virus og skelnes af en acceptabel fejl.
Indikationer og præstationsmål
Kvantitativ analyse af hepatitis B er den mest pålidelige og giver dig mulighed for at bekræfte de data, der er opnået ved ELISA-metoder. Han er udpeget, når:
- opnåelse af et positivt diagnostisk resultat af ELISA;
- behandling af en patient med en etableret diagnose af viral leverskade
- i diagnosen hepatitis blandet etiologi;
- om nødvendigt bestemme viral belastning hos en patient.
Da enzymimmunanalysemetoden anvendes mere omfattende i udøvelsen af en smitsomme sygeplejerske, kan nogle patienter med mild sygdom behandles uden at tælle viralbelastningen. Men PCR betragtes generelt som "guldstandarden" for diagnostik i hepatologi, da det på grund af det unikke resultat, fjerner en række organisatoriske problemer. Derfor har patientens retning for kvantitativ analyse følgende mål:
- opnåelse af data om antallet af virale partikler i patientens blod;
- bekræftelse af det akutte forløb af hepatitis og rettidig kontrol af kronisk sygdom
- konstant påvisning af latente virusbærere med positive ELISA-test, overvågning af deres viremier
- beslutning om udnævnelse af antiviral behandling, dens kombination og opsigelse.
Det væsentligste mål at anvende en kvantitativ PCR-test til detektion af HBV er at identificere mulige kombinationer af behandling. I tilfælde af høj viral belastning giver analysens resultat specialistet mulighed for at fortsætte med kombinationen af lægemidler. Under behandling er det let at bestemme effektiviteten af den foreskrevne farmakologiske behandling baseret på resultatet af PCR. Kun vejledende ved hjælp af data om immunanalysemetoder er det umuligt at fastslå, om behandlingen og dens nuværende effektivitet er rettidige. Derfor er en kvantitativ sanntidsprøve en nødvendig analyse inden behandling med akut hepatitis, latent virusinfektion med høj viremi og kronisk HBV.
Fortolkning af kvantitative PCR testresultater
Fortolkningen af resultaterne af den kvantitative PCR-test bør udføres af patientens behandlende læge. Det er nødvendigt at evaluere den diagnostiske indikator og bestemme terapeutiske taktikker.
En standardanalysator er i stand til at producere en kvantitativ indikator, som afspejler antallet af kopier af virus DNA, der er til stede i det undersøgte venøse blod. Måleenheder - kopier / ml, IE / ml (kopier pr. Milliliter, internationale enheder pr. Milliliter). Fortolkningen af resultaterne er angivet i tabellen med angivelse af forskellige måleenheder.
Undersøgelser af hepatitis B-viruset (ELISA og PCR)
Hepatitis B virus "s" antigen (HBsAg)
Hepatitis B-overfladeantigen i serum er normalt fraværende.
Påvisning af hepatitis B overfladeantigen (HBsAg) i serum bekræfter akut eller kronisk infektion med hepatitis B-virus.
Ved akut sygdom detekteres HBsAg i serum i de sidste 1-2 uger af inkubationsperioden og de første 2-3 uger i den kliniske periode. Cirkulation af HBsAg i blodet kan være begrænset til nogle få dage, så du bør stræbe efter en tidlig indledende undersøgelse af patienter. ELISA-metoden tillader at detektere HBsAg hos mere end 90% af patienterne. Næsten 5% af patienterne registrerer ikke de mest følsomme forskningsmetoder HBsAg, i sådanne tilfælde bekræftes etiologien af viral hepatitis B ved tilstedeværelsen af anti-HBcAg JgM eller PCR.
Serum HBsAg-koncentrationen i alle former for hepatitis B-sværhedsgrad ved sygdommens højde har et betydeligt spektrum af udsving, men der er et vist mønster: I den akutte periode er der et omvendt forhold mellem serum HBsAg koncentration og sværhedsgrad af sygdommen.
Høje koncentrationer af HBsAg er mere almindelige i milde og moderate former for sygdommen. I svære og ondartede former er koncentrationen af HBsAg i blodet ofte lav, og i 20% af patienterne med svær form og i 30% med et malignt antigen i blodet kan det slet ikke påvises. Udseendet på denne baggrund hos patienter med antistoffer mod HBsAg betragtes som et ugunstigt diagnostisk tegn; Det er bestemt i maligne former for hepatitis B.
I det akutte forløb af hepatitis B falder koncentrationen af HBsAg i blodet gradvist indtil fuldstændig forsvinden af dette antigen. HBsAg forsvinder hos de fleste patienter inden for 3 måneder efter begyndelsen af en akut infektion.
Et fald i koncentrationen af HBsAg med mere end 50% ved udgangen af 3. uge i den akutte periode indikerer som regel en tæt afsluttet infektionsproces. Vanligvis hos patienter med en høj koncentration af HBsAg ved sygdommens højde detekteres det i blodet i flere måneder.
Hos patienter med lave koncentrationer af HBsAg forsvinder meget tidligere (nogle gange flere dage efter sygdommens begyndelse). Generelt går tiden for HBsAg-detektion fra flere dage til 4-5 måneder. Den maksimale påvisningsperiode for HBsAg med et glat forløb af akut hepatitis B overstiger ikke 6 måneder fra sygdommens begyndelse.
HBsAg kan findes hos raske mennesker som regel ved profylaktiske eller utilsigtede studier. I sådanne tilfælde undersøges andre markører af viral hepatitis B, anti-HBcAg JgM, anti-HBcAg JgG, anti HBeAg, og leverfunktionen studeres.
I tilfælde af negative resultater er det nødvendigt at gentage undersøgelser af HBsAg.
Hvis gentagne blodprøver i mere end 3 måneder afslører HBsAg, klassificeres denne patient som en kronisk patient med viral hepatitis B.
Tilstedeværelsen af HBsAg er ret almindelig. Der er mere end 300 millioner luftfartsselskaber i verden, og i vores land er der omkring 10 millioner luftfartsselskaber.
Afslutning af HBsAg-cirkulation med efterfølgende serokonversion (dannelse af anti-HBs) indikerer altid genopretning - sanering af kroppen.
En blodprøve for tilstedeværelsen af HBsAg anvendes til følgende formål:
- inkubationsperiode
- akut sygdom
- tidligt opsving
- vedvarende kronisk hepatitis;
- levercirrhose
til screening og identifikation af patienter i risikogrupper:
Evaluering af forskningsresultater
Resultaterne af undersøgelsen udtrykkes kvalitativt - positivt eller negativt. Et negativt resultat indikerer fraværet af serum HBsAg. Et positivt resultat - identifikationen af HBsAg indikerer en inkubation eller akut periode med akut viral hepatitis B såvel som kronisk viral hepatitis B.
Antistoffer mod nukleare antigen af hepatitis B virus JgG (anti-HBcAg JgG)
Normalt er serum anti-HBcAg fraværende i serum.
Hos patienter med anti-HBcAg forekommer JgG i den akutte periode med viral hepatitis B og vedvarer hele livet. Anti-HBcAg JgG er den førende markør for overført HBV.
Blodprøver til anti-HBcAg JgG anvendes til at diagnosticere:
Evaluering af forskningsresultater
Resultatet af undersøgelsen udtrykkes kvalitativt - positivt eller negativt. Et negativt resultat indikerer fraværet af serum anti-HBcAg JgG. Et positivt resultat - identifikationen af anti-HBcAg JgG indikerer akut infektion, konvalescens eller tidligere overført viral hepatitis B.
Hepatitis B virus "e" antigen (HBeAg)
Normalt er HBeAg i serum fraværende.
HBeAg kan findes i serum hos de fleste patienter med akut viral hepatitis B. Det forsvinder sædvanligvis i blodet før HBs antigenet. Et højt niveau af HBeAg i de første uger af sygdommen eller dets påvisning i mere end 8 uger giver grund til at mistanke om en kronisk infektion.
Dette antigen registreres ofte i kronisk aktiv hepatitis af viral etiologi. Af særlig interesse i definitionen af HBeAg er det faktum, at dets påvisning karakteriserer den aktive replikative fase af den infektiøse proces. Det er blevet konstateret, at høje koncentrationer af HBeAg svarer til høj DNA-polymeraseaktivitet og karakteriserer aktiv replikation af viruset.
Tilstedeværelsen af HBeAg i blodet indikerer dens høje infektivitet, dvs. Tilstedeværelsen af aktiv hepatitis B infektion i kroppen undersøges og detekteres kun i nærværelse af HBs antigen i blodet. Hos patienter med kronisk aktiv hepatitis anvendes antivirale lægemidler kun, når HBeAg detekteres i blodet. HBeAg - antigen - en markør for den akutte fase og replikation af hepatitis B-viruset.
En blodprøve for tilstedeværelsen af HBe-antigen anvendes til at diagnosticere:
Evaluering af forskningsresultater
Resultatet af undersøgelsen udtrykkes kvalitativt - positivt eller negativt. Et negativt resultat indikerer fraværet af serum HBeAg. Et positivt resultat - detektering af HBeAg indikerer en inkubation eller akut periode med akut viral hepatitis B eller den fortsatte replikation af viruset og patientens infektiøsitet.
Antistoffer mod antigenet "e" af hepatitis B-viruset (anti-HBeAg)
Anti-HBeAg i serum er normalt fraværende. Udseendet af anti-HBeAg-antistoffer indikerer normalt intensiv fjernelse fra kroppen af hepatitis B-viruset og mindre infektion hos patienten.
Disse antistoffer forekommer i den akutte periode og fortsætter op til 5 år efter infektionen. Ved kronisk vedvarende hepatitis findes anti-HBeAg i patientens blod sammen med HBsAg. Serokonversion, dvs. Overgangen af HBeAg til anti-HBeAg, med kronisk aktiv hepatitis, oftere prognostisk gunstig, men den samme serokonversion forbedrer ikke prognosen for alvorlig cirrotisk levertransformation.
Blodprøver for tilstedeværelsen af anti-HBeAg anvendes i følgende tilfælde ved diagnosen viral hepatitis B:
Evaluering af forskningsresultater
Resultatet af undersøgelsen udtrykkes kvalitativt - positivt eller negativt. Et negativt resultat indikerer fraværet af antistoffer mod HBeAg i serum. Et positivt resultat er påvisning af antistoffer mod HBeAg, hvilket kan indikere begyndelsesfasen af akut viral hepatitis B, den akutte infektionsperiode, det tidlige stadium af konvalescens, konvalescens, nylig overført virus hepatitis B eller vedvarende viral hepatitis B.
Kriterierne for tilstedeværelsen af kronisk hepatitis B er:
Påvisning af hepatitis B-virus ved hjælp af PCR (kvalitativt)
Hepatitis B-virus i blodet er normalt fraværende.
Den kvalitative bestemmelse af hepatitis B-viruset ved hjælp af PCR-metoden i blodet gør det muligt at bekræfte tilstedeværelsen af viruset i patientens krop og derved fastslå sygdommens ætiologi.
Denne undersøgelse giver nyttig information til diagnosticering af akut viral hepatitis B i inkubation og tidlige udviklingsstadier af sygdommen, når patientens vigtigste serologiske markører i blodet kan være fraværende. Serum viralt DNA påvises hos 50% af patienterne i fravær af HBeAg. Analysens følsomhed ved PCR-metoden er ikke mindre end 80 virale partikler i 5 μl, den sidste DNA-detektionsprøve, specificitet - 98%.
Denne metode er vigtig for diagnosticering og overvågning af kronisk HBV. Ca. 5-10% af cirrose og andre kroniske leversygdomme skyldes kronisk bærer af hepatitis B-virus. Markører for aktiviteten af sådanne sygdomme er tilstedeværelsen af HBeAg og DNA af hepatitis B-virus i blodet.
PCR-metoden gør det muligt at bestemme i blodet DNA'et af hepatitis B-viruset både kvalitativt og kvantitativt. Det bestemmede fragment i begge tilfælde er den unikke DNA-sekvens af genet for det strukturelle protein i hepatitis B-viruset.
Påvisning af hepatitis B-virus DNA i biomateriale ved anvendelse af PCR er nødvendigt for:
Forsvindelsen af hepatitis B-DNA fra blod er et tegn på effektiviteten af behandlingen
Påvisning af hepatitis B-virus ved hjælp af PCR (kvantitativ)
Denne metode giver vigtige oplysninger om intensiteten af sygdommens udvikling, effektiviteten af behandlingen og udviklingen af resistens over for aktive stoffer.
Til diagnosticering af viral hepatitis ved PCR i serum anvendes testsystemer, hvis følsomhed er 50-100 eksemplarer i en prøve, hvilket gør det muligt at påvise viruset i en koncentration på 5 x 10 ^ 3 -10 ^ 4 kopier / ml. PCR i viral hepatitis B er absolut nødvendigt for at dømme viral replikation.
Serum viralt DNA påvises hos 50% af patienterne i fravær af HBeAg. Blodserum, lymfocytter og hepatobiopsi kan tjene som materiale til detektion af DNA fra hepatitis B-virus.
- Vurdering af niveauet af viremia er som følger:
- mindre end 2,10 ^ 5 kopier / ml (mindre end 2,10 ^ 5 IE / ml) - lav viremi;
- fra 2,10 ^ 5 kopier / ml (2,10 ^ 5 IE / ml) til 2,10 ^ 6 kopier / ml (8,10 ^ 5 IE / ml) - medium viremi;
- mere end 2,10 ^ 6 kopier / ml - høj viremi.
Der er et forhold mellem resultatet af akut viral hepatitis B og koncentrationen af HBV DNA i patientens blod. Med et lavt niveau af viremi er processen med kronisering af infektionen tæt på nul, medens processen er kronisk i 25-30% af patienterne, og med et højt niveau af viremi bliver akut viral hepatitis B oftest kronisk.
Indikationerne for behandling af kronisk HBV-interferon-alfa bør betragtes som tilstedeværelsen af markører af aktiv viral replikation (påvisning af HBV HBV, HBeAg og HBV DNA i blodserumet i de sidste 6 måneder.).
Kriterierne for evaluering af effektiviteten af behandlingen er forsvinden af HBEAg og HBV DNA i blodet, som normalt ledsages af normalisering af transaminase niveauer og langvarig remission af sygdommen, HBV DNA forsvinder fra blodet ved den 5. behandlingsmåned hos 80% af patienterne. At reducere niveauet af viremia med 85% eller mere inden for den tredje dag fra behandlingens begyndelse sammenlignet med baseline er et hurtigt og ret præcist kriterium for at forudsige effektiviteten af behandlingen.
PCR-analyse for hepatitis B
DNA-viruset fra familien Hepadnaviridae er det direkte årsagsmiddel til hepatitis B. PCR-analyse af hepatitis B tillader tilstedeværelsen af et inficeret DNA-virus, der skal detekteres i patientens blod. Resultatet af en positiv type på HBV DNA viser tilstedeværelsen af infektion i patientens blod. Det skal bemærkes, at diagnosen ved brug af PCR-analyse tillader ikke kun at bestemme forekomsten af infektion, men også dens kvantitative belastning og aktivitet. Denne metode er pålidelig, præcis og reproducerbar. Kvantificering af HBV-DNA med qPCR kan anvendes til at overvåge effektiviteten af HBV-terapi og være nyttig til forståelse af HBV's naturlige historie i et endemisk område.
Infektionsprocessen med hepatitis B forekommer gennem huslig eller seksuel kontakt - gennem direkte kontakt med inficeret blod. Efter infektion kommer virussen i leveren celler, hvor den fortsætter sin aktive reproduktion. Gennem blodbanen spredes patogene celler gennem hele kroppen. Det er værd at bemærke, at hepatitis B-celler er stærkt resistente over for syre og høj temperatur. Han er i stand til at opretholde sine skadelige egenskaber i seks måneder.
Typer af PCR til hepatitis B
Dag skelne mellem to typer af diagnostik, som er foreskrevet for en mistanke om hepatitis B virus: en kvalitativ PCR (for at bestemme med absolut nøjagtighed med forekomst af virus i blodet) og kvantitativ PCR (for at bestemme graden af aktivitet af virus).
PCR af høj kvalitet er ordineret, hvis der er mistanke om HBV-infektion, eller hvis andre diagnostiske metoder ikke har givet et klart resultat. Denne type PCR-analyse er ekstremt nem at dechifrere: negativ (ingen virus opdaget i blodet), positiv (detekteret i blodet). Den vigtigste opgave med kvalitativ analyse er at bestemme forekomsten af inficerede celler i de tidlige stadier af sygdommen. Hvis viruset blev diagnosticeret to uger efter den påståede infektion, vil effektiviteten af behandlingen være meget højere. Hvis viruset i blodet er omkring to måneder, bliver sygdommen kronisk, derfor kan den ikke helbredes fuldstændigt.
Hvis en kvalitativ diagnose bekræfter tilstedeværelsen af HBV i blodet, ordinerer lægen en kvantitativ analyse.
Kvantitativ analyse tillader at bestemme aktiviteten af virusets udvikling i patientens krop. Denne type PCR-analyse er tildelt til:
- at bestemme sygdomsstadiet
- at overvåge effektiviteten af den anvendte terapi
- at bestemme virusets resistensniveau til et bestemt lægemiddel
- til udvælgelse af stoffer.
Kvantitative indikatorer for viruset i blodet måles i IE pr. Milliliter eller DNA pr. Milliliter.
Hvis lægen ordinerer en kvantitativ diagnose straks uden at kontrollere kvaliteten, så er satsen 75 IE pr. Milliliter. Hvis der registreres færre internationale enheder, er resultatet at HBV ikke er registreret, når tallene er over normale, diagnosticeres tilstedeværelsen af viral hepatitis B.
Fortolkning af kvantitativ diagnose
Følgende indikatorer (i eksemplarer / milliliter) anses for at være normen for CRP i hepatitis B: mindre end 10 3 - inaktivt virus; fra 10 4 til 10 5 - viruset er normalt inaktivt; 10 6 - aktivt virus; 10 7 - et virus i et højt aktivitetsstadium.
Baseret på kvantitative indikatorer kan man med 100% nøjagtighed bestemme sygdommens form (bærer, akut eller kronisk), virusets reaktion til behandling, behovet for yderligere diagnostik.
Den kroniske form for hepatitis B er etableret, hvis virusets aktivitet er 10 5 kopier pr. Milliliter. En transportør er diagnosticeret, hvis scoren er under 10 5 kopier pr. Milliliter.
I behandlingsperioden er det nødvendigt regelmæssigt (en gang hver tredje måned) at gentage kvantitativ diagnostik for at overveje i tiden den periode, hvor virussen udvikler immunitet over for de anvendte lægemidler og ændrer metoden. Hvis alle undersøgelser er udført korrekt og en effektiv behandling er valgt, vil en gentagen analyse (efter tre dages behandling) vise et fald i aktiviteten af patogene celler med mindst 85%.
En leverbiopsi udføres kun i tilfælde, hvor seks måneders behandling har vist, at ALT-niveauer er dobbelt så højt som normalt, og PCR-diagnostik viser satser, der er lavere end 10 5 kopier pr. Milliliter blod.
Forbereder undersøgelsen
Venøst blod er nødvendigt til analyse. For at få de mest nøjagtige resultater er det nødvendigt at forberede proceduren: nægte at tage mad mindst otte timer før blodindsamling; i to dage for at afvise lægemiddelbehandling (det er absolut nødvendigt at advare lægen om at tage stofferne) du skal bruge tyve minutter i hvilemodus, inden du donerer blod Tolv timer før proceduren opgiver sportsøvelser, alkoholholdige drikkevarer, rygning og spiser fedtholdige fødevarer.
Det er vigtigt: hvis diagnosen er nødvendig for et barn under fem måneder, skal han give et glas kogt vand hvert tiende seksti minutter før blodindsamlingsproceduren.
Sammenfatning
PCR-analyse for hepatitis B i dag er den mest nøjagtige metode til diagnosticering af en virus. Metoden gør det muligt at bestemme de muterede og skjulte former for sygdommen for at diagnosticere sygdommen i de første infektionsdage, derfor at vælge den mest effektive behandling. Laboratorieassistenten sammenligner resultaterne af analysen med normen og fører dem til konklusionen. Data behandles inden for to uger. For at få en henvisning til PCR-analyse er det nødvendigt at kontakte en hepatolog, en smitsomme sygeplejerske eller en virolog. Det er vigtigt at huske, at jo hurtigere du kommer til lægen, jo hurtigere vil resultaterne opnås, jo mere effektive behandlingen bliver der.
Forklaring af PCR og biokemisk analyse af hepatitis
Hepatitis er en inflammatorisk proces i leveren som følge af ødelæggelsen af sine celler med giftige stoffer. Dekryptering af analysen for hepatitis gør det muligt objektivt at dømme sundhedstilstanden for en patient, der lider af leversygdom. Den smitsomme sygdom læge vil fortælle dig, hvordan man forstår resultaterne af undersøgelsen og ordinerer yderligere behandling. Patienten har selvstændigt undersøgt de opnåede data og trækker visse konklusioner, som ikke altid svarer til virkeligheden.
Hepatitis B-virus er indeholdt i serumet, og specifikke laboratoriediagnostiske metoder tillader detektion af patogenantigener og antistoffer mod det.
Liste over Hepatitis Tests
Diagnosen af viral betændelse i leveren bekræftes af særlige undersøgelser. Før patienten gennemgår et behandlingsforløb, testes patienten:
- Patienten giver blod til forskning om morgenen, mellem kl. 7.00 og 9.00. Patienten bør afstå fra at spise i 12 timer. Kvantitativ analyse af hepatitis B bestemmer tilstedeværelsen af viruset og antistoftiteren i serumet. Samtidig ordinerer lægen en undersøgelse, der identificerer HBV DNA ved hjælp af PCR reaktioner.
- I inficerede patienter er tilstedeværelsen af anti-HBc IgG protein og HBsAg antigen etableret. Specifikt immunoglobulin indikerer en hurtig forøgelse af koncentrationen af hepatitisvirus i patientens serum. I tilfælde af en negativ test for anti-HBc udføres IgG yderligere forskning om tilstedeværelsen af andre sygdomme.
- Ved at studere perioden for eksacerbation af sygdommen bestemmer de immunoglobulinerne HBeAg og anti-HBc IgM. Etableringen af den korrekte diagnose er først mulig efter opdagelsen af viral RNA - hepatitis i dette tilfælde bekræftes ved den molekylærbiologiske metode.
- PCR er almindeligt anvendt til diagnose af leversygdom - en kvantitativ metode giver dig mulighed for at ordinere en effektiv behandling af hepatitis.
Immunologisk undersøgelse
At fastslå patientens evne til at håndtere en farlig virus, diagnosticere niveauet af kropsbestandighed. På grund af hele laboratoriekomplekset er der opstillet kvantitative og kvalitative indikatorer for immunologiske faktorer - antistoffer mod hepatitis B.
HBsAg-proteinet er et overfladeantigen, der er en bestanddel af patogenens superkapslede (virale kappe). Dens hovedfunktion er deltagelse i processen med virusadsorption af raske leverceller. HBsAg peptid er resistent over for miljøfaktorer - alkali (Ph = 10), 2% opløsning af chloramin og phenol.
HBsAg-markøren er til stede i serum af en inficeret person. Umiddelbart efter dets udseende omsætter RNA ikke blot sin syntese, men indeholder også kerne Ar-partikler fra den foregående markør. Det er tegn på udviklingen af den aktive fase af hepatitis.
Tilstedeværelsen af HBeAg i en kronisk patient indikerer begyndelsen af den aktive fase af den infektiøse proces.
Anti-HBc-markør indeholder 2 typer antistoffer - IgG og IgM. Dette er et protein, der er specifikt for et antigen. Den akutte form af sygdommen er karakteriseret ved tilstedeværelsen af anti-HBc og IgM. Deres positive værdi indikerer en tidligere leversygdom.
Kvantitativ analyse
For at bestemme aktiviteten af patogenet foreskrive PCR-analyse. Det fastsætter niveauet for viral belastning og chancerne for patienten at genvinde. Polymerasekædereaktion udføres efter udløbet af den latente periode. I forskningsprocessen bestemmes ikke kun HBsAg, men også HBeAg-markøren.
Afkodning af PCR-analysen for hepatitis giver dig mulighed for at bestemme aktivitetsgraden af den patologiske proces og effektiviteten af kompleks terapi.
Lægen bestemmer, hvor følsom patientens krop er for antivirale lægemidler, og om der kan træffes foranstaltninger for at eliminere årsagerne til kronisk leversygdom. I dette tilfælde øges transaminaseindekset, og aktivitetsindekset for forårsagende middel er flere gange højere end det normale indeks; aminosyrekoncentrationen er mere end 106 kopier af DNA pr. Ml.
Blodtransaminasestandarden svarer til værdierne for enzymerne AsAT og AlAT. Alaninaminotransferase hos kvinder overstiger ikke 32 U / l, og hos mænd - 40 U / l. Koncentrationen af viruset for mennesker smittet i en tidlig alder er 100.000 eksemplarer pr. Ml.
I virusets inaktive fase og i tilfælde af anti-HBc er HBV-DNA i området 2000 IE / ml, og antallet af kopier overstiger ikke 10.000.
Molecular Hybridization Method
ELISA-responsen på hepatitis bestemmer typen af antigen med antistoffer og enzymer. Phased forskning er acceptabel, men kun en specialist, der har fået et analyseresultat i tide, kan foretage den korrekte diagnose.
Markører af viral hepatitis under immunoassay er HBsAg, anti-Hbcor IgM. Ved sygdommens begyndelse er de forhøjet: PPBR-1,55, OPcr-0,27, HBsAg er 1,239, virus-DNA detekteres ikke. Efter behandling indikerer resultatet af analysen et fald i HBsAg til 1,07, og HBeAg bliver negativt. Virus DNA er til stede.
Hvis der opnås negative IgM, IgG, IgA-værdier - er det nødvendigt at bestemme, om sygdommen er fraværende eller en fuldstændig genopretning har fundet sted.
En positiv IgG-værdi indikerer en fuldt dannet immunitet. I dette tilfælde er IgM ikke detekteret. Det er vigtigt at vide, at en undersøgelse af hepatitis afslører en høj IgM titer.
I den akutte periode af sygdommen vises negative IgG-værdier. Remission af en virussygdom ledsages af et negativt immunoglobulin IgM. ELISA er relativt simpelt og sikkert for patientens helbred.
Biokemisk blodprøve
Studien af serum identificerer patologi i kroppen, specificerer diagnosen, giver dig mulighed for at evaluere leverets arbejde og få oplysninger om metabolisme. Biokemisk analyse udføres om morgenen. Til forskning ved anvendelse af materiale afledt af venøst blod.
Det er vigtigt at følge reglerne for forberedelse til test for hepatitis C - i dette tilfælde vil dekodningen af alle indikatorer ikke blive forvrænget. Samlet bilirubin er normalt 8,55-20,2 mmol / l, og dets stigning indikerer udseendet af leversygdom. Værdierne af AlAT og Asat øges også i tilfælde af hepatitis B.
Albumin hos en sund patient er 35-55 g / l. Lavt plasmaproteinniveau indikerer viral betændelse i leveren.
Det normale LDH-indeks ligger i området 125-250 U / l, og dets vækst betyder deformation og destruktion af cellerne i det syge organ. Indikatoren for LDH (sorbitol dehydrogenase) indikerer levervævets tilstand. Den normale værdi er 0-1 U / l. Vækstraten er en karakteristisk komponent af det akutte forløb af hepatitis B eller dets overgang til det kroniske stadium.
Protein GGG har en lav aktivitet i blodplasmaet.
Dens vækst ses i betændelse i leveren og fortsætter i lang tid. Norm - 25-49 U / l for mænd, for kvinder, indikatoren er signifikant lavere - 15-32 U / l.
Dekodning af kroniske hepatitis B tegn
Identifikation af markører af leversygdom er den primære opgave hos lægen, som søger at forhindre fejl i diagnosen. Det er vigtigt at vide, at følgende fysiologiske faktorer påvirker analyseresultatet:
En tabel med antigener og deres afkodning vil give patienten mulighed for at få en ide om sygdommens art.
Typer af PCR for hepatitis B og fortolkning af resultaterne
Polymerasekædereaktion er en type blodprøve, der præcist kan detektere hepatitis B-viruset. En funktion ved metoden er, at den kan vise HBV i sine tidlige stadier - en måned efter infektion, mens et specifikt antigen kun påvises hos en patient efter 2 måneder. PCR kan detektere ikke kun en normal DNA-virus, men også mutantstammer, som ingen anden analyse kan se.
Ved afkodning af PCR for hepatitis B sammenlignes resultaterne med standardværdier. Baseret på dette konkluderes der om sygdommens tilstedeværelse (positivt resultat), virusets koncentration (aktivitet) eller fraværet af sygdommen (negativt resultat). Databehandling er 2 uger.
Typer af PCR for viral hepatitis B
Der er 2 typer diagnostik, der ordineres til hepatitis B. Højkvalitets PCR gør det muligt med 100% nøjagtighed at sige, om HBV er i blodet eller ej. Kvantitativ PCR viser virussens aktivitet, det vil sige, hvor meget HBV DNA er indeholdt i 1 ml blod.
PCR af høj kvalitet og dens fortolkning
En blodprøve for hepatitis B ved PCR kan kun påvise tilstedeværelsen af DNA-fragmenter. Udpeget i tilfælde, hvor patienten har mistanke om HBV-infektion (HBV) eller andre diagnosemetoder, giver serologiske tests f.eks. Ikke et klart svar. Afkodning af resultaterne ved udførelse af en kvalitativ analyse er meget enkel:
- negativt resultat - ingen virus;
- positivt resultat - virus opdaget.
Formålet med højkvalitets PCR er at bekræfte eller nægte tilstedeværelsen af hepatitis B-virus samt at foretage en tidlig diagnose. Hvis HBV detekteres inden for 1-2 uger efter infektion, vil behandlingen være så effektiv som mulig. Med den aktive udvikling af HBV i 2 måneder og derover bliver sygdommen kronisk og kan ikke helbredes fuldstændigt.
I tilfælde, hvor højkvalitets PCR for hepatitis er indikeret ved tilstedeværelsen af en virus, er næste trin at foretage en kvantitativ diagnose.
Kvantitativ PCR
Med henblik på effektiv behandling eller evaluering af resultaterne af terapi er det ikke tilstrækkeligt at vide, at patienten har HBV. Det er nødvendigt at kvantificere værdien af DNA fra hepatitis B virus i 1 ml blod, det vil sige viral belastning på kroppen. Denne type PCR for hepatitis B udføres i følgende tilfælde:
- Før du ordinerer behandling.
- At vurdere effektiviteten af behandlingen.
- At bestemme udviklingen af virusresistens over for de indtagne stoffer.
- At bestemme det stadium, hvor sygdommen er placeret.
Måleenheden for en virus er internationale enheder (IE / ml) eller antallet af DNA-kopier / ml, det vil sige antallet af DNA-fragmenter pr. 1 ml blod. Forholdet mellem de to enheder afhænger af det valgte testsystem og varierer fra 2 til 7 kopier / ml i 1 IE / ml. Hvis systemet ikke er kendt, bruges den gennemsnitlige værdi til konvertering:
1 IE / ml = 5 kopier / ml
Hvis kvantitativ analyse udføres straks, er marginalrenten for diagnosticering af sygdommen 75 IE / ml. Når resultatet er over denne indikator, foretages diagnosen af HBV nedenfor - HBV registreres ikke.
Behandling af kvantitativ PCR
I hepatitis B er følgende værdier for virusbelastning (viremia), kopier / ml, PCR-standarderne:
- 10 ^ 5 kopier / ml. Når der med en stor viral aktivitet er en stigning i niveauet af ALT oftere 2 gange om seks måneder, så er antiviral terapi straks ordineret.
For at finde ud af, hvordan DNA-hepatitis opfører sig i form af kronisering, det vil sige overgangen til kronisk form fra akut, anvendes også resultaterne af PCR-diagnostik:
- HBV DNA med 2 x 10 ^ 6 kopier / ml betyder, at erhvervelsen af den kroniske form af sygdommen er uundgåelig.
Forbereder undersøgelsen
For at bestemme tilstedeværelsen af HBV ved hjælp af PCR, tages blod fra en ven. Proceduren udføres altid strengt på en tom mave, og det er bedst at komme til laboratoriet om morgenen, når den naturlige hviletid fra mad er 8 timer. For at resultaterne af undersøgelsen skal være korrekte, er det nødvendigt at vide på forhånd, hvordan man forbereder sig på at gå til klinikken korrekt. Yderligere trin er som følger:
- Afvisning fra fede fødevarer, rygning, alkohol og sport i 12 timer før proceduren.
- Hvil i 20 minutter umiddelbart før donation af blod.
- Inden proceduren startes, skal sygeplejersken advares om de indtagne lægemidler.
Advarsel! Hvis diagnosen udføres til et barn under 5 år, så en halv time før proceduren, skal han drikke 1 glas kogt vand hvert 10. minut.
Sammenfatning
Hidtil er PCR-diagnostik til påvisning af hepatitis B den mest nøjagtige metode. Metoden giver dig mulighed for at se de skjulte og muterede former for sygdommen for at identificere sygdommen i de første uger efter infektion og følgelig at foretage en effektiv behandling. Afhængigt af situationen udføres kvalitativ eller kvantitativ PCR, der er beregnet til at detektere HBV og etablere sin aktivitet. For at blive testet skal du kontakte en virolog, en smitsomme sygeplejerske eller en hepatolog.
Kernen i analysen af PCR for hepatitis B og dens resultater
Viral hepatitis B behandles med succes, hvis den detekteres i tid, og antallet af antistoffer og antigener i patientens blod er korrekt bestemt. Ved hjælp af et enzymimmunoassay for hepatitis er det muligt at opdage tilstedeværelsen af virusmarkører, men de kan ikke bestemme det nøjagtige trin i processen.
Til kvantitativ evaluering anvendte PCR diagnostik. Ved hjælp af testen er det muligt at tælle antallet af markører, forudsige sygdomsforløbet og sandsynligheden for helbredelse ved hjælp af antivirale lægemidler.
Den største fordel ved undersøgelsen er evnen til at detektere selv minimale koncentrationer af viruset for at identificere patogenet på arterietrinnet.
Diagnose af hepatitis B
Hepatitis B-virus er meget smitsom og modstandsdygtig over for ydre påvirkninger. Den forbliver aktiv i blodet af en patient i flere uger. Derfor er hver person i risiko for infektion, selvom der er observeret profylakse.
For at diagnosticere sygdommen foreskrive følgende undersøgelser:
Essensen af PCR-metoden
Den amerikanske kemiker K.Mullis modtog Nobelprisen, og hans diagnostiske metode anvendes stadig.
Forfader til PCR-metoden (polymerasekædereaktion) betragtes som en videnskabsmand fra Norge H. Kleppe. Han begyndte først at udføre amplifikationen (genopretning) af DNA ved hjælp af en kort kæde af DNA, det vil sige en syntetisk primer (en slags kopi).
Men forskeren undlod at realisere sin ide. Lignende undersøgelser blev foretaget af den amerikanske kemiker K.Mullis, der i 1993 blev tildelt Nobelprisen for sin opfindelse. Siden da har PCR været anvendt til at etablere faderskab, diagnosticere genetiske sygdomme og opdage virus.
Essensen af reaktionen er, at ved hjælp af enzymer kopieres et bestemt stykke DNA. Du kan kun kopiere det område, der svarer til de angivne parametre, og hvis det er i den præsenterede prøve. Følgende komponenter anvendes til at starte reaktionen:
- Matrix DNA med et websted, der skal kopieres.
- Primers tilsvarende i struktur til DNA.
- Polymerase, det vil sige enzymet som udløser reaktionen. Det skal være termostabilt, det vil sige at modstå temperatur ekstremer.
- Løsning med visse parametre, der sikrer reaktionens gennemgang.
Reaktionen udføres i flere trin:
Til påvisning af hepatitis B anvendes to typer reaktioner: kvantitativ og kvalitativ.
Kvantitativ PCR
Den kvantitative metode bestemmer mængden af HBV-genomet
Kvantitativ PCR involverer samtidig oprettelse af kopier af DNA-fragmenter og bestemmelse af antallet af molekyler. Måling udføres efter hvert trin, det vil sige i realtid. Dette opnås ved anvendelse af fluorescerende prober, som indgår i en kæde af molekyler og glød i en bestemt periode af undersøgelsen.
Denne metode anvendes til at detektere DNA-fragmenter, der er markører for hepatitisvirus. Ved hjælp af den kvantitative metode er det muligt at præcis isolere genotypen af viruset. Med andre ord beregnes antallet af kopier af HBV-genomet pr. Patientcelleantal.
Kvantitativ analyse giver svar på følgende spørgsmål:
- Med hvilken intensitet udvikler sygdommen sig.
- Hvor effektiv er behandlingen.
- Har stoffet modstand udviklet sig?
Der er også behov for kvantitativ måling til diagnosticering af kronisk infektionsstadium. Hvis mængden af DNA er under 100 stk / ml ved det normale niveau af transaminase, er personen en bærer af viruset.
I den akutte fase er mængden af antistoffer meget højere. I antiviral terapi viser en stigning i antallet af antistoffer udviklingen af lægemiddelresistens, dette er et signal til justering af behandlingen.
PCR af høj kvalitet
PCR af høj kvalitet giver mindre information, men kan eliminere infektion.
PCR af høj kvalitet kan kun fastslå tilstedeværelsen af patogenet i blodet. Hvis de er fraværende, er patienten ikke smittet, hvis patogen kommer ind i blodet, vil resultatet blive positivt.
Imidlertid er det ved hjælp af kvalitativ reaktion umuligt at afklare virusets genom, sygdomsstadiet. Derfor har diagnosen HBV udført både kvantitativ og kvalitativ måling.
Forbereder undersøgelsen
Venøs blod kræves til PCR-analysen. Dette skal ske om morgenen på tom mave.
Patienten skal korrekt forberede sig på undersøgelsen:
- I 10 timer til at nægte mad, kan du kun drikke rent vand.
- På tærsklen for at holde op med alkohol, i 4 timer for ikke at ryge.
- Før undersøgelsen bør undgå fysisk og følelsesmæssig stress.
- Stop med at bruge medicin i 2 dage, hvis dette ikke er muligt, er det nødvendigt at underrette laboratorietekniker. Nogle stoffer har effekt på det endelige resultat.
Fortolkning af data
I en kvantitativ reaktion evalueres de opnåede indikatorer afhængigt af antallet af DNA-kopier.
Det er nemt at fortolke kvalitetsmåling data. Han giver enten et positivt eller negativt svar.
I en kvantitativ reaktion er det muligt at evaluere de opnåede indikatorer afhængigt af antallet af DNA-kopier. Måleenhed er kopier / ml.
Dataene dekodes som følger:
- Hvis mængden af HBV DNA er mindre end 90, så er infektionen fraværende. Patienten udviklede immun immunitet efter vaccination, eller han blev helbredt af sygdommen.
- Når antallet af kopier 2x100 taler om virusbæreren.
- Nummeret 2x106 indikerer et kronisk stadium af sygdommen.
- Med DNA mere end 2x109 har patienten et akut stadium af hepatitis.
Fejlagtige resultater
Fordelene ved diagnosticeringsmetoden under anvendelse af polymerase-reaktioner er som følger:
- Direkte påvisning af patogener. I modsætning hertil tilvejebringer ELISA information om tilstedeværelsen af antistoffer mod viruset.
- Specificitet. Det vil sige, at det er DNA-regionen, der er til stede i den biomaterialeprøve, der kopieres.
- Overfølsomhed. Metoden kan endda detektere enkeltcellefragmenter.
- Diagnose af sygdomme i akutte og latente faser. Det vil sige, det er muligt at diagnosticere sygdommen på scenen af prækliniske manifestationer.
Metoden har fejl, der fører til falske resultater. Den væsentligste ulempe er sandsynligheden for forurening af materialet. Den vigtigste forureningskilde er dårligt forarbejdede reagensglas, laboratoriehænder, reagenser.
En del af DNA'et fra en tidligere reaktion kan komme ind i blodet. Derfor pålægges laboratorierne øgede hygiejniske krav: separate rum, plastrør, ultraviolet behandling af laboratorier mv.
Falske negative resultater kan skyldes nedsat følsomhed af reaktionen. Dette sker i følgende situationer:
- patienten tager medicin, for eksempel antikoagulantia;
- personen havde fysisk stress før analysen (sport, hårdt arbejde);
- infektion har fundet sted for nylig.
Hvis patienten har stor sandsynlighed for infektion, og resultatet af undersøgelsen er negativt, skal han undersøges igen.
Se også:
konklusion
Polymerasekædereaktionsmetoden er den vigtigste og mest informative for diagnosen af HBV. Det gør det ikke kun muligt at fastslå infektionsoperatørstatus, men også for at afklare sygdomsstadiet, evaluere resultaterne af behandlingen.
For en mere præcis diagnose anvendes en kvalitativ og kvantitativ måling. Ulemperne ved fremgangsmåden indbefatter sandsynligheden for forurening, reduceret følsomhed og en temmelig høj pris.
For at resultaterne skal være mest pålidelige, bør man på passende vis forberede sig på undersøgelsen og gennemføre den i klinikken med den relevante licens og et godt omdømme.
Hepatitis B DNA og PCR
DNA-test og PCR af hepatitis B-virus er de mest følsomme analyser, som detekterer molekylære DNA-spor i leveren, som identificerer tilstedeværelsen af viruset. Essensen af fremgangsmåden består i multipel kopiering af et DNA-fragment der tilhører sygdomsfremkaldende middel.
Hepatitis B-type PCR er en polymerasekædereaktion af et eksternt kemisk reagens med det biologiske materiale, der undersøges, med det formål at identificere virale DNA-molekyler i blodet og deres kvantitative indikatorer pr. Enhedsvolumen. Analysen er tildelt i følgende tilfælde:
- hvis du oplever tegn på hepatitis B hos en patient
- under diagnostiske aktiviteter for blandet hepatitis;
- at klarlægge effektiviteten af behandlingen.
Til PCR-analyse opsamles venøst blod. Før undersøgelsen skal du afstå fra at spise omkring 8 timer.
Et normalt resultat ved detektering af DNA i en virus anses for at være "ikke detekteret". Det betyder, at viruset er fraværende i blodet eller dets indhold er ubetydeligt. Den endelige diagnose kan kun udarbejdes af en specialist på grundlag af en omfattende biokemisk og immunologisk analyse af blodplasma for type B-hepatitis. Lægen ordinerer et behandlingsforløb. Selvmedicinering indebærer for stor risiko.
Venøs blodprøveudtagning er udført til PCR-analyse.
PCR-metoden gør det muligt at påvise patogenens DNA selv med minimal forekomst i den valgte blodprøve. Desuden tillader analysen at detektere antigener, der allerede er blevet udviklet til virussen. Hvert antigen angiver et bestemt stadium af sygdommen:
- HBsAg - viruset er til stede i øjeblikket.
- Anti-HBcor-patogen er i øjeblikket fraværende, men der var tidligere.
- Anti-HBs - i blodet er der antistoffer mod hepatitis B (som en mulighed - herpes, HIV, chlamydia, mycoplasmosis, candidiasis, tuberkulose, tikkebåren encephalitis og mange andre sygdomme).
Patologi og dets tegn
Hepatitis B eller HBV er en viral infektion, som påvirker leverceller. Det er farligt ikke kun ved direkte handling på organets parankyme, hvilket svækker barrierefunktionen og generel immunitet. Mere alvorlige konsekvenser er mulige, såsom levercirrhose og forekomsten af ondartede neoplasmer.
HBV overføres gennem blodet af en person, der er inficeret med hepatitis, hans ekskrement gennem kontakt med slimhinder, især under samleje, hudlæsioner gennem ikke-sterile sprøjter under blodtransfusion eller under abdominal operationer. En nyfødt kan blive smittet af sin syge mor, når han rører revnerne i brystvorterne.
Følgende symptomer er karakteristiske for hepatitis B:
Usædvanlig træthed
- øget træthed ved lave belastninger
- usædvanlig træthed
- tyngde i den rigtige hypokondrium
- nedsat appetit, kvalme
- yellowness af huden, øjens sclera;
- lyse afføring
- mørk urin
- smerter i leddene.
Inkubationsperioden, hvorefter disse symptomer begynder at forekomme, er fra en til seks måneder. Dette er perioden for ophobning af virusceller i den hepatiske blodbanen. Når deres koncentration når en kritisk masse, bryder viruset gennem membranerne af hepatocytter og fortsætter med at formere sig inde i cellerne. Som følge heraf udvikler leverceller, udvikler cirrhose, som i mangel af passende terapeutiske foranstaltninger forårsager patienten at være dødelig. En rettidig blodprøve til PCR og Hepatitis B DNA hjælper med at undgå negative.
Indikationer for PCR er:
- positiv DNA-test, der bekræfter diagnosen hepatitis B;
- akut og kronisk hepatitis;
- blandet hepatitis;
- kvantitativ bestemmelse af viruset i blodserum
- udvikling af taktik for effektiv terapi.
Forberedelse til analyse
Forberedelse til diagnose ved anvendelse af PCR bestemmes af typen af biomateriale. Så blod og urin donerer kun om morgenen, på en tom mave. Også taget udsmud og skraber fra det urogenitale område. Den eneste begrænsning for kvinder er menstruation. Køn er begrænset for begge køn på tærsklen til forskning.
Resultaterne af PCR kan kun betragtes som pålidelige, hvis patienten er korrekt forberedt til proceduren. Denne undersøgelse indebærer følgende betingelser:
- fuld af åndelig trøst, fraværet af spænding. For at sikre denne analyse kan bestås selv hjemme. Det er kun nødvendigt at ringe til en læge med det relevante udstyr;
- afholder sig fra mad, alkohol, rygning, fysisk aktivitet mindst 8-12 timer før analysen, ellers vil forskningsdataene blive forvrænget;
- 15-20 minutter fuld afslapning inden blodindsamling
- seponering af medicin (hvis dette ikke er muligt, skal laboratoriet advares)
- børn under fem år i en halv time før analysen skal gives kogt vand for at drikke i små portioner.
Hvordan er undersøgelsen
PCR-analysen er baseret på de principper, der anvendes af molekylærbiologi. De består i brugen af specielle enzymer, der spalter og replikerer dele af DNA og RNA fra det infektiøse middel, der findes i blodet. Efter denne operation identificeres de opnåede prøver af den database, der er tilgængelig i laboratoriet. På samme tid detekteres typen af infektion og koncentration i patogenens blod.
Til undersøgelsen anvendes en forstærker - en termostat, der er i stand til at opvarme og afkøle rør med biomateriale. Dette er nødvendigt for aktivering af replikationsprocesser. Nøjagtigheden af analysen afhænger af nøjagtigheden af temperaturparametrene.
Afkodningsresultater
Et positivt resultat for patienten er laboratorieafslutningen "ikke registreret". Det betyder fraværet af hepatitis B DNA i blod. I numeriske termer er dette ca. 120 IE / ml eller 200 eksemplarer pr. Samme enhed af blodvolumen. Denne værdi er normen. Kravet om biologisk materiale er, at det ikke bør være forurenet.
Afkodning af andre analyseresultater gør det muligt at foretage følgende diagnoser:
- Hepatitis B DNA-koncentration i blodet er mere end 200 eksemplarer, men under det kritiske niveau. Alvorlig patologi er fraværende.
- Viremia i mild form, op til 500 eksemplarer pr. Ml. Valget af behandling afhænger af indikatorerne for leverbiopsi og graden af forringelse af dets funktioner.
- Forøget viruskoncentration (mere end 500 kopier / ml). Den inflammatoriske proces i den aktive fase og kræver intensiv antiviral terapi.
- Maksimal viral belastning (over 800 eksemplarer pr. Ml.). Terapeutiske foranstaltninger udvikles på baggrund af patientens tilstand og er helt rettet mod den maksimale mulige forbedring.
At bestemme de kvantitative indikatorer for DNA-indholdet af hepatitis B under PCR er grundlaget for valget af terapeutisk kursus. Efter tre eller seks måneder udføres test igen for at teste effektiviteten af antiviral terapi.
Polymerase kædereaktionsegenskab
I fremgangsmåden til PCR anvendes to fremgangsmåder til bestemmelse af DNA, der tilhører viruset: kvalitativ og kvantitativ.
En kvalitativ tilgang bekræfter eller benægter tilstedeværelsen af hepatitis B. PCR er ordineret efter anmodning fra en patient, der mistanke om at han er inficeret med HBV-infektion eller i tilfælde, hvor tidlig diagnose ikke giver entydige resultater på nogen anden måde.
Hvis hepatitis B-virus kan påvises senest to uger efter indlæggelsen i kroppen, er det mest sandsynligt, at en positiv prognose for behandling er. I fremtiden vil sygdommen begynde at udvikle sig. Efter ca. to måneder kommer hun ind i en kronisk fase. En fuldstændig kur i dette tilfælde bliver umulig.
En kvantitativ tilgang til PCR anvendes først, når der opdages en virus. Han vurderer:
- specifik viral belastning på leveren
- intensiteten af sygdommens progression
- resistens mod antivirale lægemidler;
- effektivitet af behandlingen.
Disse indikatorer har direkte praktisk betydning. Specielt kvantitativ indikator for DNA. Prognosen i den akutte fase af hepatitis B afhænger af virusets koncentration i leverenes blodbanen. Således udelukker den lave koncentration af virale celler næsten fuldstændig overgangen fra akut til kronisk hepatitis. Sådanne patienter udgør ikke en fare for andre. Høj viral belastning bidrager til kronisering af den patologiske proces og muligheden for hepatitisinfektion hos personer, der er i kontakt med patienten.
Der er også en forbindelse mellem koncentrationen af virale gener i blodet og cirrhotic degeneration af leveren og forekomsten af kræft i dens parenchyma.
PCR-test hjælper lægen med at opdage virusbærere.
Effektiviteten af antiviral terapi bestemmes af graden af fald i koncentrationen af hepatitis B DNA i levercirkulationen. Et tilstrækkeligt resultat er reduktionen af viral belastning med 1-2 gange ved intensiv behandling i tre måneder til seks måneder. Lavere satser kræver en ændring i behandlingen.
Prognosen for udviklingen af patologi og udnævnelsen af passende terapi kommer fra:
- kvantitativt volumen hepatisk virus-DNA i blodserum
- relaterede biokemiske parametre (for eksempel niveauet af leukocytter i blodet og bilirubinindholdet der);
- virusinfektion markører;
- leverbiopsi resultater.
PCR med generelle formål
Analyser ved hjælp af polymerasekædereaktion hjælper lægen:
- detekterer bærere af viruset
- forudsige udviklingen af hepatitis type B;
- sørg for, at sygdommen bliver kronisk;
- overvåge virusets aktivitet i alle faser af udvikling
- identificere mutante og skjulte stammer af hepatitis B;
- evaluere effektiviteten af behandlingen af virussen, når du vælger en bestemt taktik og ændrer den i tilfælde af utilstrækkelig succes.
Fordele ved fremgangsmåden
I modsætning til andre tests, der bruges til at diagnosticere hepatitis B, har PCR:
PCR-analyse er yderst følsom.
- Enestående følsomhed. Teknikken gør det muligt for forskeren at opdage sygdomsfremkaldende middel, selvom koncentrationen af dets DNA-molekyler i blodet er minimal. Dette giver dig mulighed for at tage forebyggende og helbredende foranstaltninger i et tidligt stadium af sygdommen, når det tilsyneladende endnu ikke er udtrykt af symptomer.
- Bred dækning af muligheder. PCR kan detektere ikke kun det forårsagende middel til viral hepatitis B, men også en række andre patologier.
- Universitet af tilgange. Biomaterialet til forskning kan være blod, spyt, slimhinde og hud.
- Effektivitet. Konklusionen vil være klar nøjagtigt en dag efter blodprøveudtagning (resultatet af selve analysen opnås senest 7 timer).
- Pålidelighed. Under alle forhold i PCR-metoden vises aldrig falske data.
- Pris tilgængelighed undersøgelse. Til gengæld er PCR kun lidt højere end de sædvanlige tests, der bruger blod som biomateriale.
De eneste omkostninger ved forskning er dens teknologiske kompleksitet. Til gennemførelse af PCR af høj kvalitet kræver et ekstremt rent biomateriale, moderne udstyr og veluddannet personale. Det er bedre at ansøge om diagnostik ved hjælp af denne metode til specialiserede laboratorier.
Viral hepatitis B refererer til sygdomme, hvor en fuldstændig helbredelse kun er mulig i de tidligste udviklingsstadier. Identificere sygdommen i denne fase hjælper overfølsom diagnose ved hjælp af PCR. De første symptomer, der forårsager mistanke om leverskader af en virus, bør være en grund til at konsultere en specialist. Hvis diagnosen er bekræftet, skal behandlingen påbegyndes med det samme. Dette vil forbedre prognosen og øge sandsynligheden for at støtte leveren i en sund tilstand i mange år.