Kvalitativ analyse af PCR for hepatitis C

Hepatitis er en alvorlig sygdom, der har mange årsager. Grundlaget for dets udvikling er den direkte eller indirekte skade på leveren. I betragtning af dets betydning for hele organismen kan man kun gætte hvor svært patologien er. I denne artikel vil vi nærmere undersøge funktionerne i kurset og laboratoriediagnosen af ​​hepatitis C.

Årsagen til sygdommen er et viralt middel, der refererer til RNA-indeholdende patogener. Det har en karakteristisk egenskab - evnen til at mutere, det vil sige at ændre sin struktur. På grund af dette undgår infektionen immunsystemets angreb og fører i de fleste tilfælde til kronisk betændelse i leveren.

I betragtning af forekomsten af ​​forskellige undertyper af viruset bør valget af lægemidler være baseret på genotypebestemmelserne. På trods af en lang undersøgelse af sygdommen og funktionerne i HCV-strukturen har det endnu ikke været muligt at udvikle en specifik vaccine til sygdommen.

Vanskelighederne ved tidlig diagnose ligger i det asymptomatiske forløb af hepatitis, som følge af, at en person besøger en læge ved cirrhosefasen. For at opdage en sygdom i tide er det nødvendigt med regelmæssige lægeundersøgelser. Kun ved laboratorietest af blod er det muligt at opdage HCV og forhindre infektion hos dem omkring dig. Faktum er, at infektionsbæreren i lang tid ikke kan gætte om patologien og fortsætte med at overføre viruset til raske mennesker.

Fremgangsmåder for transmission

I de fleste tilfælde spredes virussen gennem blodet, da det indeholder den højeste koncentration af patogene stoffer. Således overføres infektionen:

• med hæmodialyse
• med en inficeret nål;
• i kampens kamp, ​​når huden er skadet, og der opstår blodkontakt
• med blodtransfusion (blodtransfusion).

Sandsynligheden for infektion under intimitet er ubetydelig, da sæd og vaginal udledning indeholder en lille mængde patogener. Risikoen for infektion øges væsentligt i strid med integriteten af ​​slimhinden i kønsorganerne. Dette observeres med aggressiv og anal sex.

Hvad angår den vertikale overførselsmetode, udføres den i arbejdsproces. I fostrets svangerskabsperiode kan patogenet ikke trænge igennem placenta til embryoet. Ved naturlig fødsel overføres det patogene middel til barnet ved at traumatisere sin hud, når kontakt med moderens blod observeres.

Efter patogenens indtrængning i en sund organisme begynder syntesen af ​​antistoffer, som er beskyttelse mod infektion og tilhører immunstrukturer. De findes i den indledende undersøgelse af en person, der anvender ELISA.

For at bekræfte diagnosen udsættes patienten for en polymerasekædereaktion. Det er en analyse af det genetiske materiale af et patogent middel og bestemmelsen af ​​viral belastning.

Laboratoriediagnose af hepatitis C

Laboratoriediagnose begynder med et enzymimmunoassay. Hovedopgaven er at opdage antistoffer produceret mod patogenet. Dens effektivitet er næsten 95%. Takket være denne undersøgelse er det muligt at identificere virusbæreren i det prækliniske stadium og sende det til yderligere undersøgelse.

En kvalitativ analyse af ELISA indikerer tilstedeværelsen eller fraværet af immunglobuliner i patientens blod. Dens resultat kan være "positivt" eller "negativt." Efter at have modtaget det første svar, sendes personen til næste undersøgelse - PCR. Prisen afhænger af kvaliteten af ​​reagenserne og laboratoriet. Omkostningerne ved polymerasekædereaktionen kan nå 4 tusind rubler.

PCR-funktioner

Ved hjælp af en polymerasekædereaktion tillader os selv en lille mængde biologisk materiale os at estimere virusbelastningen i blodet, det vil sige at beregne koncentrationen af ​​patogener i en milliliter væske.

Med fremkomsten af ​​PCR er diagnosen hepatitis blevet meget lettere. Analysen gør det muligt at identificere HCV RNA, for at etablere stadiet af den infektiøse proces og infektiøsiteten af ​​virusbæreren.

Der er flere typer genetisk diagnose:

1. Kvalitativ analyse af PCR for hepatitis C - bekræfter tilstedeværelsen eller fraværet af HCV i patientens blod:
2. kvantitativ, hvorigennem du kan beregne koncentrationen af ​​vira og etablere sygdomsstadiet. Resultatet er angivet i IE / ml eller kopier / ml (afhængigt af laboratoriet);
3. genotyping - nødvendigt for at bestemme HCV's genotype. Dette er nødvendigt for nøjagtigt udvalg af lægemidler, der vil være mest effektive i dette tilfælde. Analyse indikerer indirekte sværhedsgraden af ​​den patologiske proces i leveren. I patogenens tredje genotype er der således ofte observeret steatose, hvis basis er akkumulering af fedt i hepatocytter (dets celler). Hertil kommer, at typen af ​​virus påvirker udfaldet og varigheden af ​​det terapeutiske kursus.

Kvalitativ analyse af PCR for hepatitis C

Først og fremmest undersøges biologisk materiale i laboratoriet for tilstedeværelse af HCV RNA. Det er vigtigt at huske, at en kvalitativ analyse af hepatitis C har en vis grad af følsomhed og derfor ikke altid giver det rigtige svar. I dette tilfælde anbefales det at gennemføre laboratoriediagnostik ved hjælp af andre reagenser.

For at opnå pålidelige resultater skal testsystemer med en følsomhed på mindst 50 IE / ml anvendes.

Det diagnostiske resultat kan enten være "positivt" eller "negativt". Hvis patogenet ikke findes i blodet, er undersøgelsen afsluttet. Hvis et patogent middel påvises i prøven, kvantificeres en viral belastning.

Et falsk-negativt svar opnås, når processen brydes, for eksempel er aktive komponenter, der undertrykker opbygningen af ​​kopier af patogenet, kommet ind i mediet. Det er således ikke muligt at vise et ægte blodbillede, hvorfor en persons infektion ikke diagnosticeres.

Et falsk positivt resultat kan opnås, hvis røret til indsamling af biologisk materiale samt miljøet for undersøgelsen blev forurenet. Derudover er et sådant analysereaktion muligt, når blandede infektioner, når leveren påvirkes af flere vira, for eksempel hepatitis C og D.

Indikationer for kvalitativ forskning

Lægen kan ordinere en patient en kvalitativ undersøgelse af identifikationen af ​​RNA i hepatitis C-viruset:

• ved modtagelse af et positivt eller tvivlsomt enzymimmunoassay svar;
• til verifikation af diagnosen
• bestemme viral belastning;
• indstilling af sygdomsfasen
• diagnose af blandet infektion. Hepatitis C inficerer ofte leveren samtidig med "D" -virussen;
• bestemmelse af terapeutisk taktik under hensyntagen til kausionsmiddelets genotype
• vurdere dynamikken i ændringer under behandling med antivirale lægemidler.

Fordelene ved polymerasekædereaktionen indbefatter:

1. høj følsomhed af teknikken, hvilket gør det muligt at fastslå infektionsfaktoren i det prækliniske stadium
2. identifikation af patogenets genetiske materiale og ikke dets antistoffer;
3. muligheden for at etablere en subtype af et patogent middel;
4. høj diagnostisk hastighed, da der ikke kræves såning af materialet på næringsmediet, og det er tilstrækkeligt at anvende specifikke testsystemer. En person får resultatet efter 5 timer;
5. alsidighed. Analysen tillader at identificere ethvert genetisk materiale (RNA, DNA). Takket være dette kan lægen bekræfte hepatitis C og andre typer af sygdommen (B);
6. evnen til at opdage latent infektion.

Kvantitativ forskning

I undersøgelsen af ​​blod ved anvendelse af polymerasekæden kan reaktionen beregne antallet af patogener i et fast volumen biologisk materiale. Indikatoren er præsenteret i IE / ml. Gennem analyse er det muligt at bestemme graden af ​​smitte af patienten, bestemme stadiet af den infektiøse proces og også vurdere effektiviteten af ​​lægemiddelterapi.

På baggrund af PCR bestemmer specialisten hvilke doser af lægemidler der kan blokere reproduktionen af ​​patogener. Desuden bestemmes varigheden af ​​antiviral behandling og prognose for livet. Det er vigtigt at huske, at testsystemerne har høj følsomhed, derfor gør metoden det muligt at bekræfte infektion hos en person i det prækliniske stadium.

genotypebestemmelse

I betragtning af patogenens evne til at mutere er dens genotype nødvendig for at bestemme behandlingens taktik og valget af antivirale lægemidler. For eksempel varer behandling af HCV 1 i 48 uger, med en positiv udvikling, der kun observeres i 60% af tilfældene. Genotyper 2 og 3 har en mere gunstig prognose. Antivirale lægemidler er ordineret i 8 måneder, og deres effektivitet når 85%.

Ifølge statistikker er HCV 1, 2 og 3 i de fleste tilfælde registreret i Den Russiske Føderation.

Ved afkodning af en laboratorietest kan dette svar angives - "ikke skrevet". Dette betyder, at en virus cirkulerer i patientens kredsløb og ikke kan genkendes af testsystemet. Resultatet af analysen i dette tilfælde indikerer, at patogenet ikke er typisk for et givet geografisk område.

Hvordan får man pålidelige resultater?

For at en kvalitativ undersøgelse af PCR til påvisning af RNA af det forårsagende middel af hepatitis C viste de korrekte resultater, er det nødvendigt at overholde kravene til forberedelse til laboratoriediagnostik:

1. blodprøveudtagning udføres på tom mave, og det "sultne" mellemrum må ikke være kortere end 8 timer;
2. to dage før undersøgelsen anbefales det at holde op med at drikke alkoholholdige drikkevarer og forlade krydrede, fede og røgede retter;
3. Afbryd indførelsen af ​​stoffer, der reducerer blodkoagulation, for eksempel heparin. Hvis disse lægemidler ordineres af sundhedsmæssige grunde, skal du underrette lægen. Desuden skal specialist være opmærksom på optagelse af andre lægemidler, der kan påvirke resultatet af laboratorieforskning;
4. På tærsklen til indsamlingen af ​​biologisk materiale bør fysioterapeutiske procedurer ikke udføres og bør udsættes for alvorlig fysisk anstrengelse.

Resultaterne af analysen kan ikke kun påvirkes af den person, der donerer blod, men også af andre faktorer, nemlig:

• dårlig kvalitet blodprøveudtagning;
• manglende overholdelse af anbefalinger om transport af biologisk materiale
• utilstrækkelig uddannelse af laboratoriearbejdere
• manglende overholdelse af forskningsteknikken
• indføring af antikoagulantia (heparin) på tærsklen til blodprøveudtagning. Denne gruppe af stoffer reducerer koagulering og derved nedsætter reagensarbejdet.

I forskellige laboratorier kan det diagnostiske respons afvige lidt, men disse fejl påvirker ikke det endelige resultat af undersøgelsen.

Der lægges særlig vægt på de typer testsystemer, der anvendes i laboratoriet. Ofte gives fortrinsvis reagenser med høj følsomhed. Dette er vigtigt for patienter med lav viral belastning, fordi det er svært at opdage.

Hvor ofte udføres en laboratorietest?

Primær polymerasekædereaktion udføres hos mennesker, som er blevet detekteret ved immunoassay for antistoffer mod patogenet af hepatitis. I dette tilfælde er det tildelt til bekræftelse af infektionen hos en person og etableringen af ​​sygdomsfasen. Desuden tillader analysen at bestemme virusets undertype, hvilket er særlig vigtigt for valget af lægemidler.

Den næste periode for obligatorisk laboratorietest er 3 måneder fra starten af ​​antiviral terapi. Diagnostik gør det muligt at vurdere effektiviteten af ​​lægemidler, justere dosen eller udskifte dem.

Ud over basale tests kan PCR desuden udføres på 4 og 24 uger fra starten af ​​behandlingen. En positiv prognose af sygdommen bekræftes af et fald i viral belastning efter tre måneders behandling. For eksempel bør den falde fra 1 million IE / ml til flere hundrede tusind.

Hvis koncentrationen af ​​patogene stoffer i blodet forbliver på samme niveau eller stiger lidt, indikerer dette ineffektiviteten af ​​antivirale midler og kræver udskiftning. Ved anvendelse af PCR ved afslutningen af ​​behandlingen er det muligt at bekræfte patientens opsving.

For at korrekt fortolke resultaterne af laboratoriediagnostik er det nødvendigt at konsultere en hepatolog eller infektionssygdomsspecialist. På grund af den høje frekvens af falske responser i ELISA anvendes analysen udelukkende til den primære screening. Til en mere grundig undersøgelse af den anvendte polymerasekædereaktion.

Pro-analyse af PCR for hepatitis C-virus

Hepatitis C er en alvorlig leversygdom for enhver person. Patologien er forårsaget af flavivirus HCV, i hvilken struktur RNA molekylet er til stede, som bærer virusets generelle genetiske kode.

Patologi kan være af forskellige former, alt afhænger direkte af den generelle tilstand af personen og egenskaberne af hver enkelt organisme.

Denne struktur gør det muligt at analysere PCR for tilstedeværelsen i kroppen af ​​en virus af kategorien hepatitis C.

Det giver dig mulighed for rettidigt at identificere en virus, der er farlig for mennesker, undergå et behandlingsforløb og genoprette helbred, der beskytter kroppen mod ødelæggelsen af ​​leveren.

HCV-viruset kan manifestere sig, både i akut farlig form og kronisk. Hvis en person på et eller andet tidspunkt er blevet detekteret denne virus, skal den tildeles PCR-analyse.

Hvorfor udføres PCR-analyse?

Baseret på analysens resultater vil lægen være i stand til at lave et behandlingsregime

Laboratoriemedicinsk analyse af PCR for hepatitis C er en undersøgelse af biologisk materiale taget til bestemmelse af flavavirus. Undersøgelsen står for polymerasekædereaktion.

Det viser den totale kvantitative værdi af viral læsionen, dens kvalitative egenskaber, og det er også muligt at bestemme genotypen af ​​den virus, der indeholder RNA.

Det er vigtigt! Det er på grundlag af denne analyse, at lægen bestemmer metoden, typen af ​​terapi og dens varighed. Også gennem analyse er det muligt at bestemme den overordnede epidemiologiske faktor, det vil sige niveauet for risikoen for overførsel af sygdommen til andre bærere.

Analyse i moderne medicin kaldes også RNA-analyse. Årsagen er, at iboende for hepatitis C-flavavirus er sammensat af en partikel af RNA, hvis størrelse er ca. 30-60 nm. Et af de karakteristiske træk ved denne virus er en bestemt tilbøjelighed til mutation.

Hver underart eller genotype til stede har en række resistens. Denne omstændighed bliver grundlaget for forskellige metoder til forskning og behandling af sygdommen samt en yderligere prognose med veludført terapi.

Hvordan gør

Analysen udføres strengt på en tom mave, det vil sige venøs blod gives før morgenmaden. Testmetoden udføres ved hjælp af realtids-PCR eller meget følsom ved moderne standarddiagnostik, som udføres i realtid.

Den nedre detektionsgrænse er i dette tilfælde 15 IE / ml. Analysen udføres strengt ved anvendelse af lukkede automatiserede systemer. Hepatitis C kan bestemmes ved anvendelse af tests som COBAS AMPLICOR med dets overordnede følsomhedsniveau på 50-100 IE / ml.

Det er vigtigt! Alle typer af lignende moderne laboratorieundersøgelser udføres på basis af hensyntagen til en bestemt følsomhedsgrænse.

Vi taler om reagensets evne til at detektere minimumsniveauet af reagensets evne til at bestemme viruset i det biologiske materiale, der undersøges. Hvis der ikke er nogen sygdom i kroppen, vil resultatet af undersøgelsen ligne "ikke fundet".

Billedet viser et PCR analyse kredsløb:

Typer af PCR-analyse og dets resultater

Hvis du har de mest mindre lidelser og smerter inden for cookies, skal du straks kontakte en læge, der vil foretage en grundig undersøgelse. PCR-analyse for hepatitis C er baseret på tre hovedpunkter:

1. Kvantitativ analyse.
2. Kvalitativ analyse.
3. Genotypebestemmelse.

De udførte tests giver mulighed for at bestemme og identificere den nøjagtige karakter af viremia og forskellige genetiske plan symptomer på patogenens tilstedeværelse. I direkte forhold til følsomheden fra det diagnostiske system, der udføres, kan medicinsk forskning udføres én gang samt en bekræftelse.

Dette skal gøres for at klarlægge tidligere opnåede resultater og anvendes i dette tilfælde af et mere følsomt reagens.

PCR af høj kvalitet

En kvalitativ analyse for PCR er et andet navn til en undersøgelse, såsom polymerasekædereaktion. Med testens standardfølsomhed, som gør det muligt at bestemme tilstedeværelsen af ​​en viral mikrobe, vil indikatorerne ligge i intervallet 10-500 IE / ml.

Med en negativ analyse af sygdommen vil analysen vise, at det samlede koncentrationsniveau i patientens blod vil være en størrelsesorden, der er lavere end den generelle modtagelsestærskel for diagnosystemet.

Hvis et "ikke detekteret" svar blev opnået under kvalitets-PCR til efterfølgende behandling, skal du kende reagensets totale følsomhedstærskel. Hvad angår det positive svar, kan PCR-analysen allerede opnås den 4. dag efter infektionen. Standardproteinfraktioner til etablerede flavavirus kan forekomme meget senere.

Den generelle plan for PCR-analyser kan afbildes som følger:

Kvantitativ PCR

Kvantitativ PCR er en speciel indikator for den producerede viral belastning, hvilket afspejler det overordnede niveau af virus-RNA-koncentration i menneskekroppen. Denne indikator viser mængden af ​​virale RNA enzymer, der er til stede pr. Kubikcentimeter taget fra blodvenen.

Resultaterne af denne undersøgelse i medicinsk forskning er angivet i enheder på en milliliter. På certifikater udstedt i hænderne kan denne indikator ligne 1,7 millioner eller 1.700.000 IE / ml.

Kvantitativ PCR-analyse er tildelt disse patienter, før der udføres antiviral terapi. Anden gang afholdes den 12. behandlingsuge, som giver dig mulighed for korrekt at evaluere resultaterne af terapi med hepatitis C. Med andre ord gør analysen det muligt at bestemme sådanne vigtige parametre som:

1. Infektionsniveauet, det vil sige graden af ​​risiko for mikrobiell overførsel fra en inficeret person til en sund person er bestemt. Jo højere koncentrationen af ​​flavavirus RNA er, desto højere er sandsynligheden for infektion hos en anden person, som er vigtig i seksuelle forhold.
2. Det samlede niveau af effektivitet og den valgte behandlingsmetode.
3. Dette er en ideel mulighed for at bestemme varigheden og prognosen for antiviral terapi. Som regel er jo højere belastningen, jo længere behandling vil vare.

Det er værd at vide, at kvantitativ PCR afhænger af den specifikke type laboratorietest og følsomhedsgrænsen. Den laveste grænse for den etablerede standard er indikatoren når ikke 600.000 IE / ml.

Gennemsnittet ligger i området 600.000 til 700.000 IE / ml. Hvis resultaterne blev opnået over 800.000 IE / ml, bestemmer lægen straks en høj koncentration af et stof, såsom RNA, med et virus, som er til stede i sammensætningen.

Det er vigtigt! Det direkte forhold mellem niveauet for HCV RNA og sygdommens sværhedsgrad antyder, at denne virus er til stede i den generelle blodsammensætning og noterer sig også patologiens kompleksitet. Patienten kan have en tilstrækkelig høj viral belastning. Desuden indikerer dette forhold, at der er en ret alvorlig skade på cellerne.

genotypebestemmelse

På grund af den relativt høje mutationsaktivitet af HCV i naturen er det i løbet af den udførte test muligt at bestemme, hvordan typen af ​​virus er til stede i en syges blod. I moderne medicin er 11 genotyper af en virus som hepatitis C. Det omfatter et ret stort antal forskellige underarter eller subtyper.

Typer 1,2 og 3 er kendt og almindelige i Rusland. Generelt er genotyping et meget vigtigt element i den udførte analyse. Med det forstår lægen niveauet af resistens eller modstand fra patologien til de valgte lægemidler.

Næsten altid, på baggrund af denne analyse, er fremtidig behandling bygget. Dette er vigtigt, fordi der er behandlingsregler som:

Kvalitativ analyse for hepatitis C

8. marts, 2017, 12:29 Ekspertartikler: Nova Vladislavovna Izvchikova 0 10.547

En kvalitativ analyse af polymerasekædereaktionen - PCR for hepatitis C bestemmer tilstedeværelsen eller fraværet af HCV i kroppen. Under laboratoriebetingelser undersøges strukturen af ​​RNA, som vil omfatte virussen. I tilfælde af detektion af virus C er det nødvendigt at gennemgå et behandlingsforløb, da leverens forsømte tilstand vil medføre alvorlige konsekvenser. PCR af høj kvalitet udføres efter genopretning for at bekræfte fraværet af antistoffer. Udpeget og til rutinemæssig inspektion. Med en lav koncentration af det forårsagende middel i blodet kan PCR (kvalitativ) muligvis ikke registrere noget, fordi diagnostiksystemet har sine egne følsomhedstærskler. I tilfælde af sygdoms første fase eller den milde form udføres PCR ved ultradiagnostik på ekstremt følsomt udstyr.

Hvad er RNA-virus?

Betegnelsen RNA i hepatitis C-viruset (eller hepatitis C-virus-RNA) er selve leversygdommen. Virus C binder sig til den sunde celle i kroppen ved at trænge ind indeni. Over tid, spredt gennem hele kroppen, er det kun nødvendigt at komme ind i blodet. Som et resultat trænger patogenet i leveren, smelter sammen med sine celler og virker hårdt. Leverceller (hepatocytter) arbejder under indflydelse, undergår ændringer, og derved dør de. Jo længere virus C er i leveren, desto større dør antallet af celler. Over tid udvikler farlige sygdomme, hvilket fører til malign degeneration og død.

Infektion af leveren med denne type virus kan ikke manifestere sig eksternt. I mange år eller årtier føles en inficeret person helt sund, og kun en tilfældig undersøgelse afslører oftest patologi. Ved donering af blod til hepatitis undersøges en del af RNA-kæden (ribonukleinsyre), som er en del af det humane gen (DNA). Resultaterne af laboratorieprøver bør ikke anvendes til selvbehandling, da dette kun er en indikator. Det præcise billede og yderligere diagnose er bedre bestemt af lægen.

Når det er færdigt: indikationer for forskning

Ved bekræftelse af HCV udføres PCR-analyse (polymerasekædereaktion). PCR-undersøgelser hjælper med at finde årsagsmidlet i RNA-strukturen og ordinere en effektiv terapi. Udpeget i følgende tilfælde:

• påvisning af tegn på betændelse i leveren
• screening undersøgelser for forebyggelse;
• undersøgelse af personer i kontakt
• diagnose af hepatitis af blandet oprindelse (bestemmelse af hovedpatogenet);
• bestemmelse af reproduktionsaktiviteten af ​​viruset i kronisk form
• levercirrhose
• at bestemme effektiviteten af ​​den foreskrevne behandling.

Forskning PCR ordinerer en læge til at bestemme effektiviteten af ​​behandlingsforløbet af hepatitis.

Der er en kvalitativ såvel som kvantitativ analyse af PCR. Kvantitativ PCR viser procentdelen af ​​RNA med virusbærere i blodet, og kvalitativ indikerer viral tilstedeværelse eller fravær. En positiv indikator for kvalitet (tilstedeværelse af Hepatitis C RNA) har også behov for kvantitativ forskning. Et højt niveau af koncentration af det forårsagende middel til hepatitis C er forbundet med risikoen for dets overførsel, det vil sige infektion af andre. Lavt tal er bedre behandles. Mængden af ​​RNA-vira i blodet er ikke relateret til intensiteten af ​​sygdommen. PCR-analyse gøres også i tilfælde af interferonbehandling for at ordinere behandlingens varighed og kompleksitet.

Funktioner af højkvalitets PCR analyse for hepatitis C

En kvalitativ analyse er tildelt en polymerasekædereaktionsindikator for alle patienter, der har antistoffer mod hepatitis C i deres blod. De, der har været syge og genvundet, skal genoptage testen. Det anbefales at tage en analyse for hepatitis B, så i tilfælde af en positiv konklusion og for hepatitis D. Også kvalitativt analyseret reaktion skal udføres i forbindelse med andre blodprøver. Analyser viser et komplet billede af viral spread.

Fra testresultaterne vil kun en positiv test for hepatitis C være synlig eller negativ, dvs. tilstedeværelsen eller fraværet af en virus. Hvis udgangen er "detekteret", er viruset og fortsætter med at være aktivt. Betegnelsen "ikke detekteret" angiver fraværet af en virus eller dens lille mængde. Med denne indikator skal man huske på, at diagnostiske systemers analytiske følsomhed er forskellig, og at RNA hepatitis C stadig kan være i blodet, men ikke manifesteret i analysen.

En særlig følsom PCR-metode afslører ultra hepatitis C selv i små mængder. En fluorescenshybridiseringsundersøgelse anvendes, hvilket er mange gange højere end standard PCR-systemer. Metoden anvendes i flere tilfælde:

• mistænkte skjulte former for hepatitis C;
• PCR-diagnostik bekræftede ikke patogenet, men der er antistoffer;
• i tilfælde af nyttiggørelse
• at opdage tidlig infektion.

Tilbage til indholdsfortegnelsen

Dekodningsanalyse

PCR-dekodningen af ​​HCV påvirker den endelige beslutning, når der laves en diagnose, især med ultrametoden. Den største ulempe ved denne undersøgelse er streng overholdelse af sterile betingelser for prøven og materialerne. En lille afvigelse viser nogle gange unøjagtige analytiske konklusioner, komplicerer diagnoser og efterfølgende behandling. Analyse af PCR til bestemmelse af hepatitis RNA viser ikke altid selvtillid et billede af sygdommen, undertiden er unøjagtigheder tilladt og i begge retninger.

Diagnosticering af hepatitisvirus, det anbefales at anvende en omfattende undersøgelse.

Norm for indikatorer

Fraværet af JgM antistoffer mod viral hepatitis C i resultaterne af undersøgelsen betragtes som normen i analysen af ​​polymerasekædereaktionen. Samtidig viser resultaterne af serologisk analyse tilstedeværelsen af ​​antistoffer mod virus C, og dette ligger også inden for det normale område. En kvalitativ definition viser ikke intensiteten af ​​sygdommen, den afslører kun årsagsforbindelsen for hepatitis C i RNA. Denne analyse gentages efter behandling for at bekræfte den faktiske genopretning.

afvigelser

Hvis JgM antistoffer mod HCV RNA er til stede, indikerer dette en udviklingsinfektion. Sygdommen på samme tid fortsætter akut eller kronisk, manifesteret i forskellige stadier. Hvis der registreres et fald i antallet af antistoffer, vil analysen indikere, at resultaterne af behandlingen blev opnået under genopretning. Der er yderst sjældne tilfælde af falske positive resultater i diagnostik. De findes hos kvinder under graviditet og hos mennesker med andre smitsomme sygdomme.

PCR-analyse for hepatitis C

Ved diagnosen "kronisk viral hepatitis C (CVHS)" kræves en omfattende undersøgelse af personen, som omfatter kliniske, laboratorie- og instrumentelle undersøgelser. Vigtigt ud fra diagnosens synspunkt for den korrekte diagnose er PCR-metoden - polymerasekædereaktionen.

Hvad viser denne analyse, og hvorfor er det nødvendigt?

Denne laboratoriemetode registrerer RNA i hepatitis C-viruset i humant blod. Sammen med det enzymbundne immunosorbentassay (ELISA) til antistoffer mod viruset anvendes PCR til at diagnosticere CVHC og dets patogengenotype. Denne forskning er en af ​​de nyeste metoder til laboratoriediagnostik. Dens pålidelighed ved CVHS overstiger 97%, hvilket betragtes som en meget god indikator for forskning.

Der er tre PCR blodprøver for CVHS: kvalitativ, kvantitativ og virusgenotyping. Den første undersøgelse (kvalitative analyser) af viruset registrerer det i blodet og anvendes derfor kun til diagnose.

Den anden (kvantitative) undersøgelse bestemmer graden af ​​viral belastning på kroppen, derfor bruges til at overvåge effektiviteten af ​​behandlingen.

Den tredje PCR (genotyping) præciserer diagnosen, der etablerer virusets genotype, hvilket er meget vigtigt for udnævnelsen af ​​korrekt antiviral behandling.

Kernen i polymerasekædereaktionsteknikken er anvendelsen af ​​enzymer, som multiplicerer patogenets genetiske materiale i biomaterialet. Under processen med sådan replikation opvarmes røret med blod flere gange og afkøles til den temperatur, der kræves for at accelerere den enzymatiske reaktion. Som et resultat af disse manipulationer øges mængden af ​​det virale genom mange gange, så det kan detekteres selv med en minimal mængde.

PCR diagnostik har mange fordele i forhold til andre laboratorietests:

• høj følsomhed - 97-98%;
• garanteret analytisk specificitet (afslører nøjagtigt det patogen, du vil finde, og ikke dets relaterede stamme);
• Gennemførelseshastighed (det tager ikke mere end 2 dage at få en konklusion).

Tre typer PCR-assays

PCR-analyse af høj kvalitet tildeles alle patienter, hvor ELISA-analyse har fundet antistoffer mod HVGS-viruset. Efter udførelse af højkvalitets-PCR kan to svarmuligheder opnås: "RNA er detekteret" eller "RNA registreres ikke." For at detektere mindste mængden af ​​virus i blodet er der brug for testsystemer med en følsomhed på mindst 50 IE / ml. Hvis koncentrationen af ​​viruset i patientens blod er mindre end diagnosticummet kan bestemme, kan resultatet af undersøgelsen være falsk negativt. For at undgå en sådan diagnostisk fejl skal laboratorier, der udfører PCR-diagnostik, være forsynet med meget følsomme testsystemer. I laboratoriet "Invitro" anvendes f.eks. Test med en følsomhed på 15 IE / ml. Laboratoriearbejdere er forpligtet til at give oplysninger om testens følsomhed til patienter og læger efter deres første anmodning.

Kvantitativ analyse af PCR bestemmer graden af ​​viremia, det vil sige koncentrationen af ​​patogenet i blodet, viral belastning. Resultatet af denne undersøgelse er i modsætning til højkvalitets PCR udtrykt i tal, for eksempel 2 x 10 * 6 IE / ml, hvilket betyder 2 millioner internationale enheder i 1 ml blod. Nogle laboratorier bruger en anden indikator - antallet af kopier / ml. Disse to indikatorer er nemme at konvertere: 1 international enhed svarer til 4 kopier af RNA. Således betyder 2 x 10 * 6 IE / ml at 8 × 10 * 6 kopier af viralt RNA i 1 ml, dvs. 8 millioner eksemplarer i 1 ml blod.

Genotyping er definitionen af ​​en af ​​de seks genotyper af en virus. Det kliniske billede, udviklingsgraden af ​​leverkomplikationer og prognosen for patientens fremtidige liv afhænger af årsagsmodtagerens genotype. Genotypen af ​​viruset er meget vigtig allerede i diagnosticeringsfasen, da kombinationen af ​​lægemidler og varigheden af ​​det terapeutiske forløb, der skal tildeles patienten, afhænger af dets korrekte bestemmelse.

Men selv denne tilsyneladende "perfekte" laboratorieforskning har sine ulemper:

• undersøgelsen replikerer det genetiske materiale af alle patogener, endog ikke-levende, hvilket kan forvride resultatet. For at overvåge effektiviteten ved hjælp af PCR gennemføres der derfor ikke tidligere end 2 måneder efter den foregående reanalyse, således at de døde vira kan "forlade" patientens organisme;
• En del af det virale genom, der bestemmes ved hjælp af testsystemer, kan teoretisk være til stede i andre vira eller mikroorganismer, så der er mulighed for et falsk positivt svar;
• vira muterer hurtigt. Sommetider er hastigheden og omfanget af virusmutation så høj, at testsystemet stopper med at fange deres genom. Som et resultat er et falsk negativt resultat muligt.

For at udjævne disse mangler foretager producenter af laboratorietestsystemer til PCR-diagnostik hele tiden deres test, herunder krydsreaktioner og følsomhed over for en bestemt genotype af viruset.

Hvordan man tager en PCR-test for hepatitis C?

For at indgå en PCR-undersøgelse skal være pålidelig, er det nøje at overholde reglerne for forberedelsen af ​​dets adfærd:

• undersøgelsen udføres på en tom mave (glukose, fedtstoffer, mineraler, der kommer ind i blodet fra fødevarer, kan påvirke hastigheden og kvaliteten af ​​enzymreaktionen);
• Gabet mellem det sidste måltid og blodprøveudtagningen til analyse skal være mindst 8 timer;
• på tærsklen til undersøgelsen er det forbudt at tage alkohol og forbruge fede fødevarer, hvis elimineringstid er forlænget;
• en dag før du går til laboratoriet bør undgå stærk fysisk og følelsesmæssig stress;
• indtil blodprøveudtagning ikke anbefales at ryge.

For at undgå udfald af falske konklusioner skal den påståede patient komme til laboratoriet lidt tidligere, end blodet vil blive taget. Det tager 15-20 minutter for en person at tage vejret, roe sig ned. Adrenalin, som er til stede i blodet efter en hurtig tur, kan påvirke resultatet af undersøgelsen.

Hvis patienten refererer til analyse, tager medicin, skal han underrette lægen herom. Det er muligt, at nogle af dem skal nægtes i et stykke tid (hvis muligt).

Resultatet af analysen af ​​PCR for hepatitis C

Afkodning af resultaterne involveret i laboratorielægen i laboratoriet, der gennemførte analysen. Afkodning er bestemmelsen af ​​afvigelsen af ​​resultatet opnået fra normen. Indikatorhastigheden er etableret direkte af producenten af ​​testsystemet, som bruges af laboratoriet til diagnostik. Det er derfor ikke overraskende, at virusbelastningen i nogle laboratorier bestemmes i IE / ml, og i andre i kopier / ml.

Efter at have opnået konklusionen er det nødvendigt at kunne fortolke det korrekt. Behandlingen af ​​resultaterne af undersøgelsen skal udføres af den behandlende læge hos patienten med hepatitis C. Kun efter en objektiv, instrumentel og laboratorieundersøgelse af patienten kan lægen opnå en tilstrækkelig mængde data til korrekt fortolkning af de opnåede PCR-resultater.

Evaluering af kvalitativ analyse giver som regel ikke problemer, selv hos patienter. Resultatet der kan kun være en: "detekteret" eller "ikke detekteret". I dette tilfælde er den anden af ​​dem normen.

Indikatorer for kvantitativ analyse er vanskeligere at fortolke. Det viser graden af ​​viral belastning på patienten. Selv blandt hepatologer er der ingen konsensus om, hvordan man skal behandle det påvist viremia. De fleste læger er tilbøjelige til at tro på, at en høj belastning på mere end 8 × 10 * 5 IE / ml bør overvejes. En belastning på mere end 1 × 10 * 7 IE / ml betragtes som meget høj, mens en lav belastning er mindre end 4 × 10 * 5 IE / ml.

Graden af ​​viral belastning indikerer virulens (aggressivitet) af viruset: jo større er dets mængde i blodet, jo hurtigere kan komplikationerne af leveren udvikle sig. En høj koncentration af viruset i en gravid kvindes blod øger sandsynligheden for dens indtrængning gennem hæmatocenterale barriere mod fosteret. Viremia påvirker også effektiviteten af ​​behandlingen: med lavt tal er effektiviteten af ​​behandlingen højere end hos de høje.

For at være sikker på nøjagtigheden af ​​analysen af ​​PCR for hepatitis C, er det kun at foretrække kun de laboratorier, der er velprøvede. Prispolitik i dette tilfælde bør ikke spille en primær rolle.

Anvendelse af PCR-diagnostik

Polymerasekædereaktion (PCR) i molekylærbiologi er en eksperimentel metode til detektion af virus. Det giver dig mulighed for signifikant at øge koncentrationen af ​​visse nukleinsyrefragmenter (DNA) i prøver af biologisk materiale, hvilket gør det muligt at bestemme (genkende) og tælle dem.

Analysen udføres som følger. Genetisk materiale (en blodprøve), som potentielt kan inkludere det ønskede gen, indføres i røret. Der er også placeret primere - kemisk syntetiserede segmenter af en lille længde af det ønskede gen.

DNA- eller RNA-polymerase tilsættes også til beholderen, det er i stand til at lineere en nukleinsyrekæde, som er helt identisk med originalen. Den resulterende sammensætning injiceres og et sæt af fire frie nukleotider - et specielt byggemateriale til RNA eller DNA, hvoraf den ene indeholder radioaktive fosforpartikler.

Den resulterende blanding opvarmes til 95-96 ° C, hvorfor to DNA-spiraler, som normalt er sammenflettet, væves. Derefter afkøles lægemidlet, hvorefter primrene selv vedhæfter den ønskede region af det virale genom, hvilket forhindrer RNA (eller DNA) i at omdanne dobbelthelixen.

Ved afkøling søger polymerasen efter en fri nukleotidkæde. For funktionen af ​​dette enzym er der brug for en enkelt kæde af nukleotider. Da polymerase glider langs DNA-kæden (som en ring på et reb), kan den ikke arbejde på en dobbelt helix.

Herefter udføres en gentagen varmecyklus som følge af hvilke nukleotidkæder er adskilt. Ved hver af disse cykler af PCR øges mængden i prøven af ​​det ønskede hepatitisgen eksponentielt, og resten af ​​det genetiske materiale produceres (vokser) lineært.

Efter rensning af opløsningen fra nukleotidrester og separation ved elektroforese af DNA-kæder ved molekylvægtparameteren kan man let bestemme, om der er et ønsket gen i prøven under undersøgelse eller ej.

Fordele ved PCR

Laboratorietestning ved anvendelse af PCR muliggør endnu mere information end tilstedeværelsen af ​​virus-RNA. Ved at bestemme parameteren for niveauet af radioaktiv stråling er det muligt at identificere, hvor meget genetisk materiale oprindelig var indeholdt i prøven under undersøgelse. I tilfælde af hepatitis bestemmes indikatoren for niveauet af viral belastning.

En anden fordel ved denne fremgangsmåde er den meget høje grad af følsomhed af CR-reaktionen. Det er meget højere end de klassiske metoder til at opdage virus. Ideelt er for at identificere det ønskede gen til PCR kun tilstrækkelig en virus i prøven.

Desuden er PCR helt specifik. Dens primere er designet på en sådan måde, at de fuldt ud svarer til de unikke regioner af de ønskede gener, som ingen anden sekvens har. Ligesom fingeraftryk er unikke, har hvert gen unikke sekvenser af nukleotider.

Kvalitativ analyse af PCR

Kvalitativ analyse afslører kun tilstedeværelsen af ​​viruset i blodet. Denne test skal udføres for alle patienter, hvor der findes antistoffer mod hepatitis C i blodet. Det kan kun resultere i en af ​​to værdier: "detekteret" eller "ikke detekteret". I en sund person skal normen (referenceværdi) "ikke registreres".

Der er en særlig fortolkning af sådanne resultater af den kvalitative forskning:

• Resultatet er "detekteret". Dette betyder, at et fragment af RNA, der er specifikt for hepatitis C-viruset, blev fundet i den analyserede prøve af biologisk materiale taget. Derfor er der en kendsgerning, at patienten er inficeret med hepatitis C-viruset. og på dette tidspunkt inficerer det nye leverceller i kroppen.
• Resultatet er "ikke fundet." En sådan dom viser, at der i det analyserede prøve af det opnåede biologiske materiale i dette laboratorium ikke blev fundet noget fragment af RNA, der er specifikt for hepatitis C-viruset.

I den akutte fase af hepatitis C-virus-RNA'et kan sådanne kvalitative undersøgelser ved PCR-metoden detekteres allerede efter 1-2 uger umiddelbart efter kroppens infektion, det vil sige længe før forekomsten af ​​antistoffer mod hepatitis selv.

Upålidelige testresultater fra denne undersøgelse kan opnås ved:

• forurenet biomateriale;
• tilstedeværelsen af ​​heparin i patientens blod
• Tilstedeværelsen i prøven af ​​kemiske eller proteinstoffer (inhibitorer), som påvirker de forskellige komponenter i PCR.

For at foretage en kvalitativ analyse af PCR kræves der ikke specielt forberedelse af patienten til undersøgelsen. Det anvendte materiale er venøst ​​blod.

Evaluering af resultater

Højkvalitets PCR-test har en vis grad af følsomhed, og afhængigt af nøjagtigheden af ​​forskningen og niveauet af udstyr i laboratoriet kan variere fra 10 til 500 IE / ml.

Dette betyder, at hvis viruset i blodprøven er til stede ved en meget lav koncentration (mindre end tærskelfølsomhedsværdien af ​​dette laboratorium), kan resultatet for den syge patient "ikke detekteres". På grund af dette er det, når man gennemfører en kvalitativ analyse af PCR med et lavt niveau af viremia (lav viruskoncentration), for eksempel for patienter, der gennemgår antiviral terapi, meget vigtigt at kende følsomhedstærsklen for dette diagnostiske system.

Varianter af diagnostiske systemer

For at kontrollere det virologiske respons anbefales det at anvende diagnostiske systemer med en følsomhedstærskel på mindst 50 IE / ml, når der udføres antiviral behandling. Disse kriterier er opfyldt, for eksempel med Cobas Ampicolor HCV-test analysatorer (præcis til 50 IE / ml) samt RealBest HCV RNA (med en følsomhed på 15 IE / ml).

Ifølge WHO's anbefalinger er det nødvendigt at basere en endelig diagnose af hepatitis C alene på basis af tre gange detektion af C-virus-RNA i patientens serumprøver i mangel af andre sorter af hepatitismarkører.

Foruden PCR-metoder anvendes en TMA-analyse (transkriptionel amplifikationsmetode) også til at detektere HCV RNA hos patienter. Den har den bedste følsomhedstærskel (5-10 IE / ml), men i vores land er en sådan testmetode endnu ikke meget almindelig.

Udvalget af detekterede virus modifikationer

En sådan kvalitativ bestemmelse i serum af tilstedeværelsen af ​​Hepatitis C virus RNA gør det muligt at bestemme flere genotyper af denne virus. I øjeblikket ved videnskaben mere end seks genotyper af denne virus, såvel som omkring 10 subtyper af denne sygdom.

I vores land er fælles vira 1, 2, 3 genotyper. Laboratorier kan opdage følgende genotyper: 1a og 1b, 2a, 2b og 2c, samt 3, 4, 5a og 6, uanset subtypen. For alle virusændringer er detektionsspecificiteten 100%.

PCR kvantitativ analyse

Ved anvendelse af en kvantitativ PCR-test bestemmes koncentrationen af ​​hepatitisvirus i blodprøver (viral belastning). Denne test for viremia (viruskoncentration) giver dig mulighed for at bestemme antallet af enheder af et bestemt genetisk materiale (selve viral RNA), som detekteres i en vis mængde. I dette tilfælde bestemme dens koncentration i 1 ml, hvilket svarer til 1 cu. cm.

Kvantitative analyseparametre er udtrykt i tal, til dette formål anvendes internationale enheder (IE) pr. Milliliter (ml), benævnt IE / ml, som måleenheder. Nu, i nogle laboratorier kan mængden af ​​virus bestemmes i andre enheder: Antallet af kopier pr. Ml er angivet som kopier / ml.

• Datoer. For hepatitis C udføres en sådan kvantitativ analyse af PCR umiddelbart før behandlingens start. Derefter den 1., 4., 12. og 24. uge. Evaluering på den 12. uge er vejledende, det gør det muligt at bestemme effektiviteten af ​​terapien.
• Forberedelse til analyse. For at foretage en kvantitativ analyse af PCR kræves der ikke særlig forberedelse af patienten til undersøgelsen. En halv time før prøveudtagning skal ikke ryge. Venøst ​​blod anvendes som laboratoriemateriale.

Evaluering af resultater

For forskellige laboratorietestsystemer er der forskellige konverteringsfaktorer for denne indikator i IE / ml. I gennemsnit tager de konverteringsparameteren, hvor 4 kopier / ml = 1 IE / ml. Det vil sige, hvis laboratoriet giver resultatet af PCR-analyse 2,4 * 10 6 kopier / ml, så skal denne parameter opdeles i 4, og vi får 6 * 10 5 IE / ml.

En belastning på 800.000 IE / ml betragtes som høj, hvilket omtrent svarer til 3.000.000 eksemplarer / ml. Lav viremia svarer ifølge nogle forfattere til parametrene for kvantitativ PCR under 400.000 IE / ml.

Som resultat af den kvantitative test kan de endelige resultater leveres ikke i form af en digital værdi, men: "under måleområdet" eller "ikke detekteret".

• Vurdering: "Under måleområdet." Dette indikerer, at den kvantitative test ikke kunne detektere hepatitis C viral RNA, men selve viruset er til stede i kroppen i meget lave koncentrationer. Dette fremgår af den ekstra kvalitetstest, der bekræfter faktumet af tilstedeværelsen af ​​viruset.
• Rating: ikke fundet. Dette resultat indikerer, at den kvantitative test ikke findes i prøve RNA-virus.

Parameteren for viral belastning bestemmer først og fremmest graden af ​​infektiøsitet af sygdommen, niveauet af "infektiøsitet" af patienten. Jo højere patientens viruskoncentration er, jo større er sandsynligheden for at overføre den til andre mennesker. For eksempel under samleje med en syg person eller vertikalt. Denne kvantitative indikator hjælper også med at bestemme effektiviteten af ​​behandlingen af ​​patienten.

Gennemførelsen af ​​en kvantitativ analyse af CCP er vigtig for antiviral terapi, vurderingen af ​​dens succes og planlægning af kursets varighed. Således med en hurtig reaktion fra kroppen til behandling og en lav grad af viremi, kan behandlingens varighed reduceres.

Hvis den kvantitative PCR-parameter reduceres langsomt, bør antiviral terapi udvides eller ændres. Hvis niveauet af viral belastning er lav, er dette en gunstig faktor i terapi, hvis forhøjet, så er den anvendte metode ineffektiv, og stofferne eller metoderne til deres anvendelse bør ændres.

Kvalitativ og kvantitativ analyse af PCR for hepatitis C: negativ, positiv, transkription

Hepatitis C er en viral leversygdom forårsaget af flavivirus HCV (fra engelsk hepatitis C-virus), hvis struktur indeholder et ribonukleinsyremolekyle (RNA). RNA bærer virusets genetiske kode. Dens tilstedeværelse tillader analyse af PCR for hepatitis C.

Faren for HCV for en person ligger i, at det såkaldte serologiske vindue (tiden mellem infektion og udseendet af en reaktion fra immunsystemet) kan være ret lang - fra flere uger til seks måneder.

Det registrerer ikke infektion og starter behandling i tide.

Afhængig af organismens individuelle karakteristika kan bæreren af ​​HCV manifestere sig i en akut form såvel som en kronisk sygdom, som kræver lang og dyr behandling. Ved påvisning af antistoffer mod HCV udføres en række laboratorieundersøgelser, herunder PCR for hepatitis C. Denne test er udført for alle personer, hvis blodantistoffer mod HCV blev fundet.

Hvad er PCR-analyse?

Laboratorieanalyse af PCR for hepatitis C - en undersøgelse af biologisk materiale for at identificere forekomsten af ​​flavavirus.

Polymerasekædereaktion (som forkortelsen står for) viser den kvantitative værdi af kroppens virale beskadigelse, dens kvalitative egenskaber såvel som genotypen af ​​det virus, der indeholder RNA.

På deres grundlag såvel som på basis af yderligere analyser bestemmes terapiens metode og varighed samt den epidemiologiske faktor (graden af ​​risiko for overførsel til en anden bærer).

Hvad er Hepatitis C RNA Analyse?

Hepatitis C PCR kaldes også RNA-analyse (HCV RNA), fordi Flavavirus indeholder en RNA-partikel med en virionsstørrelse på 30-60 nm. Et af træk ved denne mikroorganisme er en høj tilbøjelighed til mutationer.

Hver af virusens underarter (genotyper) har en anden resistens, som forårsager forskellige behandlingsmetoder og arten af ​​den yderligere prognose for patienten.

Biologisk materiale (venøst ​​blod) gives i tom mave og testes som regel ved Real-Time PCR-metoden (høj følsom realtidsdiagnostik med en lavere detektionsgrænse på 15 IE / ml ved brug af lukkede automatiserede systemer).

Der er andre test, for eksempel COBAS AMPLICOR med en følsomhed på 50-100 IE / ml. For enhver laboratorietest er tærsklen for følsomhed vigtig, dvs. Reagens evne til at detektere mindste koncentration af virus i biologisk materiale.

Typer af analyse for hepatitis C ved PCR

Hepatitis C PCR indeholder tre vigtige komponenter:

• kvalitativ analyse
• kvantitativ analyse
• genotypebestemmelse.

Disse tests kan bestemme viremias natur samt patogenens genetiske egenskaber. Afhængigt af diagnosticeringssystemets følsomhed udføres undersøgelsen en gang, og undertiden foretages en anden test med et mere følsomt reagens for at bekræfte eller forbedre resultaterne.

Højkvalitets PCR hepatitis C

Hepatitis C PCR-analyse kvalitativ er et andet almindeligt navn for analysen af ​​polymerasekædereaktionen. Testens standardfølsomhed, som gør det muligt at opdage tilstedeværelsen af ​​virale læsioner, ligger i området 10-500 IE / ml.

En negativ PCR-analyse for hepatitis C viser, at viruskoncentrationen i patientens blod er under følsomhedstærsklen i diagnosesystemet.

Hvis højkvalitets PCR gav svaret "ikke registreret", så er det vigtigt at finde ud af tærsklen for følsomheden af ​​reagenset for efterfølgende behandling.

Proteinfraktioner til flavavirus forekommer meget senere.

Hepatitis C Kvantitativ PCR

Hepatitis C PCR-kvantitativ er en indikator for viral belastning, hvilket afspejler niveauet af flavavirus-RNA-koncentration i kroppen. Dette er en indikator, der viser, hvor mange fragmenter af virus RNA er indeholdt pr. Kubikcentimeter blod. Resultaterne af PCR af hepatitis C RNA i en kvantitativ test i det konventionelle system er angivet i internationale enheder pr. Milliliter (IE / ml) og kan registreres på forskellige måder, fx 1,7 millioner eller 1.700.000 IE / ml.

Kvantitativ PCR-diagnostik af hepatitis C er ordineret til patienter inden starten af ​​antiviral terapi og i uge 12 i behandling for at evaluere resultaterne af den valgte metode til behandling af HCV. Viral belastning gør det muligt at bestemme tre vigtige indikatorer for sygdommen:

• infektivitet, dvs. graden af ​​risiko for virusoverførsel fra en bærer til en anden (jo højere koncentration af flavavirus-RNA er, jo højere er sandsynligheden for at inficere en anden person, for eksempel gennem seksuel kontakt);
• Metode og effektivitet af behandlingen
• Varigheden og prognosen for antiviral terapi (jo højere viral belastning, jo længere behandling varer).

Kvantitativ PCR-diagnostik af hepatitis C afhænger af typen af ​​laboratorietest og tærsklen for dens følsomhed. Den nederste grænse for normen anses for at være indikatoren op til 600.000 IE / ml, gennemsnitsværdien ligger i området 600.000-700.000 IE / ml. Resultater på 800.000 IE / ml og derover betragtes som høje niveauer af RNA-indeholdende virus.

genotypebestemmelse

På grund af HCV's høje mutationsaktivitet i naturen er det vigtigt at identificere hvilken virusgenotype der er i patientens blod ved testning. I alt er 11 genotyper af hepatitis C-viruset registreret på planeten, som omfatter mange underarter (undertyper). På territoriet i Den Russiske Føderation fordelt 1,2 og 3.

Hepatitis C PCR RNA sammen med genotyping er en meget vigtig bestanddel af analysen, da tillader lægen at bestemme resistens (modstand) af viruset, vælge de relevante lægemidler og ordinere et behandlingsforløb.

Genotyping tillader også indirekte bestemmelse af levers tilstand. For eksempel ledsages 3 genotypen af ​​HCV ofte af steatose, hvor fedt ophobes i organets celler.

En blodprøve til PCR for hepatitis C bør producere en figur, der bestemmer genotypen. Laboratorie svar kan sige "ikke skrevet" - og det betyder, at en virus er i humant blod, som ikke detekteres af testsystemet. Dette kan indikere, at genotypen ikke er typisk for et givet geografisk område. I dette tilfælde skal du gentage analysen med en højere følsomhed i diagnosesystemet.

Afkodning af PCR-analyse for hepatitis C

Testen for hepatitis C PCR kvantitativ dekryptering kan baseres på ovenstående data. Når man opnår resultaterne af laboratorietests, skrives normalt følgende data:

• "Fundet" / "ikke fundet" (højkvalitets PCR til hepatitis C);
• antallet af RNA-holdige fraktioner, for eksempel 831.680 ME / ml (kvantitativ PCR-analyse);
• figuren der bestemmer HCV's genotype, for eksempel - 1, 2, 3, 4;
• Navnet på testen er oftest i realtid.

Det vigtigste ved at dechifrere PCR-analysen for hepatitis C er det andet element, der viser virusbelastningen, som bestemmer prognosen, metoden og varigheden af ​​behandlingen.

Hvis PCR-testen for hepatitis C er negativ, og ELISA er positiv - hvad betyder det?

For at dechiffrere laboratorieprøver er det vigtigt at kontakte en hepatolog eller en smitsomme sygeplejerske, som vil forklare de informationer, der er opnået i overensstemmelse med typen af ​​diagnosesystem og dens følsomhedstærskel. I medicinsk praksis er der mange data om blodprøver, som kan vildlede en person uden medicinsk uddannelse.

For eksempel, hvis testen for hepatitis C PCR er negativ, og ELISA er positiv, kan det betyde, at der ikke findes nogen HCV i patientens blod for øjeblikket, men han har tidligere haft en akut form for hepatitis C. Det antages, at et positivt enzymbundet immunosorbentassay (ELISA) viser, at der er antistoffer i blodet, der er produceret efter invasionen af ​​virussen tidligere. Men i moderne medicinsk praksis anses ELISA-analyse for at være utilstrækkeligt pålidelig og giver ofte untypiske resultater, så læger bruger det som en primær screening. Ved diagnosticering af en sygdom styres specialister netop ved PCR-test.

Nyttig video

Følgende video fortæller på en meget detaljeret og interessant måde, hvad essensen af ​​PCR-metoden er, hvordan analysen udføres:

konklusion

Til analyse af PCR af hepatitis C tages venøs blod normalt. Ofte er der et dobbelt indtag af biologisk materiale - til ELISA, og direkte til PCR-test. For korrekte testresultater er overholdelse af de grundlæggende regler for laboratorieindsamling af biologisk materiale påkrævet:

• blod til analyse gives i den første halvdel af dagen på en tom mave;
• mellem måltid og blodindsamling skal tage mindst 8 timer;
• Alkohol og stegte fødevarer bør også udelukkes, før testen tages.
• i løbet af dagen før bloddonation er det nødvendigt at undgå høj fysisk anstrengelse.

Blodtestresultater er normalt klar næste dag.